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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫沉淀 Protein A+G Sepharose Beads 使用请教
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阳光123456

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1楼 2012-12-19 17:56:12
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henryxue

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-02-15 07:31:46
想要除干净是不现实的，只能尽可能降低，大概有这些方法：
做pre-clear，就是在裂解液加抗体前，先加没有包被抗体的beads孵育混匀一段时间，去除一部分蛋白和beads的非特异结合
提高裂解液的盐浓度和去垢剂浓度，但要注意其也会破坏弱的相互作用
在孵育完后多洗洗
当然你的抗体也是决定因素之一，有些抗体确实效果不好会有更强的非特异结合
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2楼2012-12-19 19:27:45
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一步一步

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个应该有很现成的Protocol吧。。貌似跟WB的操作相似啊。。。
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3楼2012-12-21 20:11:53
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mguo15

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-02-15 07:32:18
protein A+G 的非特异性是固有的，可以改变你的柱子清洗程序，加入tween什么的，可以降低非特异性，具体的方法还要自己试的。protein work is art, not science!
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4楼2012-12-25 11:30:51
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阳光123456

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阳光123456

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大柏树

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大柏树

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阳光123456

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大柏树

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