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zangying1989

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体pTrcHis A和pETDuet-1差别。。谢谢。。

载体pTrcHis A和pETDuet-1差别。。谢谢。。
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zangying1989

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-12-19 11:22:01
不同点
1、启动子不一样,pETDuet-1为t7启动子,需要在有DE3溶原菌中表达,比如BL21(DE3),JM109(DE3),Rosetta(DE3),需要用IPTG诱导;pTrcHis A为Trc启动子,trp-lac复合型启动子,不仅能在有DE3溶原菌中能表达, ...

您好,那我想再请教一下,同一基因,用pETDuet-1为载体在菌中表达出蛋白,破了细胞测出酶活,而用pTrcHis A为载体时,测不到酶活,可能是载体原因吗?谢谢啦
3楼2012-12-20 09:45:24
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, good! 2012-12-20 15:00:37
不同点
1、启动子不一样,pETDuet-1为t7启动子,需要在有DE3溶原菌中表达,比如BL21(DE3),JM109(DE3),Rosetta(DE3),需要用IPTG诱导;pTrcHis A为Trc启动子,trp-lac复合型启动子,不仅能在有DE3溶原菌中能表达,在无DE3溶原菌中也可以利用组成型启动子trp表达。
2、pTrcHis A为单基因表达载体,pETDuet-1 Novagen公司Duet系列质粒,为双基因表达载体。
相同点
1、抗性一样
2、ori一样,所以这两个质粒不能共表达。
用过的只有这些了,还有pTrcHis A有myc抗原什么的,这些没用上,就不总结了。

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Thank-you,so-blue.
2楼2012-12-19 11:22:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

引用回帖:
3楼: Originally posted by zangying1989 at 2012-12-20 09:45:24
您好,那我想再请教一下,同一基因,用pETDuet-1为载体在菌中表达出蛋白,破了细胞测出酶活,而用pTrcHis A为载体时,测不到酶活,可能是载体原因吗?谢谢啦...

有可能,trc启动子的强度要弱于T7,不知道二者的表达量有没有做过比较。
Thank-you,so-blue.
4楼2012-12-20 11:19:08
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