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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于平末端连接
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jackyoung

新虫 (正式写手)
设计策略的时候能不能尽量避开这种情况？效率太低

发自小木虫Android客户端
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CestLaVie
11楼2016-01-15 20:04:12
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那雨那女孩

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jackyoung at 2016-01-15 20:04:12
设计策略的时候能不能尽量避开这种情况？效率太低

恩，现在找到方法了，谢谢
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辟邪
12楼2016-01-17 17:41:53
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几氧化氮

新虫 (初入文坛)
实在不行可以做cloneEZ
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13楼2016-10-23 16:36:26
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你可以在你的目的片段的引物上加平末端酶切位点，这样就不用多一步末端补平了，分子实验，操作步骤不要太多，能简就减。
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采菊东篱下，悠然见南山。
14楼2017-05-04 08:44:58
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 那雨那女孩 at 2016-01-15 18:08:06
就是用平末端连接后，目的基因和载体之间会不会多出来的碱基（除了补平，会不会多加碱基），平末端连接是不定向的吗？之后该怎么筛选？大神...

筛选只能是测序。你也可以在目的片段的正向引物上加酶切位点XHOL1,然后用质粒上的酶切位点nde1。双酶切后
————nde1————XHOL                                                        正向连入就只能切出10几BP。                                          

————nde1————————————————————XHOL    反向连入就能切出和目的片段一样大小的序列。
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采菊东篱下，悠然见南山。
15楼2017-05-04 15:21:40
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