| 查看: 18575 | 回复: 381 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[资源]
流式细胞仪实验方法和Bio-Rad荧光定量PCR应用指南完整版
|
||
|
流式细胞仪实验方法 一、 实验准备 1． 标本制备： 2． 最小化非特异性结合： 二、凋亡 1．凋亡的检测方法：网站和其它 2．PI 染色法 3．Annexin V 法 4．TUNNEL 法 三、细胞因子 1．激活的细胞因子 2．CBA 四、血小板 1．活化 2．活化检测 3．网织血小板 五、红细胞 1．网织红细胞 2．PNH 3．胎儿红细胞 六、肿瘤学 1．DNA 细胞周期 2．蛋白 3．多药耐药 4．微小残留白血病 目录 1. 荧光定量PCR概述 2 1.1 荧光定量PCR的主要概念 2 1.1.1 什么是荧光定量PCR? 2 1.1.2 荧光定量PCR工作原理 3 1.1.3 优化的qPCR 实验特点 4 2. 实验开始 8 2.1 总体注意事项 8 2.2 qPCR实验设计注意事项 9 2.2.1 单重实验或多重实验?9 2.2.2 方法选择 9 2.2.2.1 DNA 结合染料 10 2.2.2.2 基于荧光标记的引物或探针的化学机理 12 2.3 SYBR Green I 反应设计及优化 19 2.3.1 引物和扩增子的设计 19 2.3.2 实验体系的确定及优化 20 2.3.2.1 退火温度的优化 20 2.3.2.2 用标准曲线进行反应的评估 22 2.4 TaqMan 探针反应设计及优化 23 2.4.1 引物和探针设计 23 2.4.2 实验体系的确定及优化 24 3. 多重实验注意事项 28 3.1 多重实验的引物及探针设计 28 3.2 多重实验的报告基团和淬灭基团选择 29 3.3 多重实验前单个实验的优化 29 3.4 多重实验的验证 29 3.5 多重实验的优化 30 目录 4. 荧光定量PCR数据分析 34 4.1 绝对定量 35 4.1.1 什么时候使用绝对定量? 35 4.1.2 使用标准曲线进行绝对定量 35 4.2 相对定量 37 4.2.1 什么时候使用相对定量 37 4.2.2 用质量单位作为标准进行相对定量 38 4.2.3 用参照基因作为标准进行相对定量 40 4.2.3.1 2 –∆∆C T (Livak) 方法 41 4.2.3.2 用参照基因的∆C T 法 42 4.2.3.3 Pfaffl 方法 43 5. 基因表达分析 46 5.1 实验设计 46 5.2 RNA 分离 47 5.2.1 样品收集 47 5.2.2 RNA 提取 48 5.2.3 检测核酸的质量和数量 48 5.3 cDNA 模板的制备(反转录) 49 5.4 qPCR 实验方法选择 50 5.5 应用举例 51 5.5.1 多重分析的反应组分 51 5.5.2 循环条件 51 5.6 基因表达数据分析 52 6. 基因型/等位基因分析 54 6.1 实验设计 55 6.2 使用TaqMan 方法设计引物和探针 56 6.3 DNA 提取和样品处理 57 6.4 TaqMan探针实验的反应组分 58 6.5 实验优化 59 6.6 TaqMan探针实验的循环条件 59 6.7 等位基因分析的数据处理 59 6.7.1 等位基因分析的结果验证 59 6.7.2 基因型识别 72 |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : Bio-Rad荧光定量PCR应用指南完整版.pdf
- 附件 2 : 流式细胞仪实验方法.pdf
2012-12-16 12:42:04, 5 M
2012-12-16 12:42:05, 643.75 K
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
FoodSci06» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有179人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有3人回复
320楼2015-10-22 10:11:32
简单回复
jinhx872楼
2012-12-16 13:59
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
2012-12-16 14:32
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
2012-12-16 17:18
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
diandong6楼
2012-12-16 23:13
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
diandong7楼
2012-12-16 23:13
回复
顶一下，感谢分享！
yzwan19楼
2012-12-17 10:24
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
yzwan110楼
2012-12-17 10:24
回复
顶一下，感谢分享！
2012-12-17 11:42
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
2012-12-17 11:43
回复
顶一下，感谢分享！
sunshine0913楼
2012-12-17 15:48
回复
五星好评 顶一下，感谢分享！
sunshine0914楼
2012-12-17 15:49
回复
顶一下，感谢分享！
