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LELE901008

铁虫 (初入文坛)

[求助] pMA5连接基因总是连不上，求解！！！！

pMA5连接基因总是连不上，求解！！！！
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1楼 2012-12-16 10:07:26
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把你的目的片段和载体双酶切处理回收后按下面的摩尔比连接
目的片段：载体=5:1  10微升体系   连接物dna总量1微克左右 连接酶不要加太多
16摄氏度用pcr仪连接过夜
制备的感受态
转化
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加油
2楼2012-12-16 11:55:47
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LELE901008

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2012-12-16 11:55:47
把你的目的片段和载体双酶切处理回收后按下面的摩尔比连接
目的片段：载体=5:1  10微升体系   连接物dna总量1微克左右 连接酶不要加太多
16摄氏度用pcr仪连接过夜
制备的感受态
转化

过程我知道，但是总是连不上，挑转化子的提质粒却比pMA5空载还小，单双酶切后一样大，能解释吗？
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3楼2012-12-16 13:12:47
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