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湖海冰心

铜虫 (小有名气)

[求助] 非还原电泳加热与不加热的问题

最近对一个蛋白进行reduced SDS-PAGE电泳分析,发现在主带二倍分子量处有细微的条带,于是做non-reduced SDS-PAGE分析,分别对样品进行加热和不加热处理,发现加热后的电泳结果与还原型电泳无明显差异,但是不见热的非还原电泳与加热的非还原电泳差异显著,不加热的非还原电泳在二倍分子量处条带亮度增加,请各位给个解释,谢谢。
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惩忿窒欲
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湖海冰心

铜虫 (小有名气)

怎么没人回帖,我顶
惩忿窒欲
2楼2012-12-09 11:28:31
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niuyee

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有的论坛说,加热也会促使二硫键打开,但是药典非还原与还原电泳 都需要加热  我也正犯难
3楼2012-12-21 09:40:22
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

跑电泳时不一定非要加热,因为有些蛋白在加热条件下会发生降解。当然,你的这个明显不是降解,只是加热时,促进蛋白与考马斯亮蓝之间的接触,加剧蛋白的变性,即二硫键的形成较为困难。如果不加热的话,二硫键之间容易相互作用,形成聚体。针对你这个情况,可以不加热,直接跑胶。
4楼2012-12-21 15:24:48
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mguo15

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不加热的非还原电泳在二倍分子量处条带亮度增加,应该是有二聚现象。有纯品如果条件许可,可以色谱测定一下分子量。如果没有纯品,做个梯度胶电泳也能说明问题。不过走电泳,想看二倍分子量就不要加热。室温与上样液用枪混合就上样吧。
5楼2012-12-25 11:56:20
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