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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 非还原电泳加热与不加热的问题
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湖海冰心

铜虫 (小有名气)

[求助] 非还原电泳加热与不加热的问题

最近对一个蛋白进行reduced SDS-PAGE电泳分析，发现在主带二倍分子量处有细微的条带，于是做non-reduced SDS-PAGE分析，分别对样品进行加热和不加热处理，发现加热后的电泳结果与还原型电泳无明显差异，但是不见热的非还原电泳与加热的非还原电泳差异显著，不加热的非还原电泳在二倍分子量处条带亮度增加，请各位给个解释，谢谢。
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惩忿窒欲
1楼 2012-12-08 10:58:50
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湖海冰心

铜虫 (小有名气)
怎么没人回帖，我顶
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惩忿窒欲
2楼2012-12-09 11:28:31
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niuyee

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有的论坛说，加热也会促使二硫键打开，但是药典非还原与还原电泳 都需要加热  我也正犯难
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3楼2012-12-21 09:40:22
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

跑电泳时不一定非要加热，因为有些蛋白在加热条件下会发生降解。当然，你的这个明显不是降解，只是加热时，促进蛋白与考马斯亮蓝之间的接触，加剧蛋白的变性，即二硫键的形成较为困难。如果不加热的话，二硫键之间容易相互作用，形成聚体。针对你这个情况，可以不加热，直接跑胶。
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4楼2012-12-21 15:24:48
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mguo15

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不加热的非还原电泳在二倍分子量处条带亮度增加，应该是有二聚现象。有纯品如果条件许可，可以色谱测定一下分子量。如果没有纯品，做个梯度胶电泳也能说明问题。不过走电泳，想看二倍分子量就不要加热。室温与上样液用枪混合就上样吧。
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5楼2012-12-25 11:56:20
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