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关于蛋白质的鉴定定量什么之类的问题~((T_T))~
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哎...我都没脸来问各位大神那么白痴的问题... 可是我写不出来作业我还是要来问...protein quantification,,,,,protein detection,,,还有 protein identification 有什么区别?? quantification是定量,,那就是用BCA或者Bradford Assay就可以quantification了吗?? 那 detection 和 identification呢?? 我一直没懂那个SDS-PAGE ,, ELIAS ,,Mass Spectrometry 和 Westren blotting是用来做什么的?? 貌似SDS-PAGE和,Mass Spectrometry都是用来测分子量??  测分子量有什么用??? .....知道分子量就能知道这个是什么蛋白质了??还有,,我的载体里有6x his tag.....这个重组蛋白质就.....该用哪种方法来detection和quantification比较好?? 还有.... 测纯度要用什么测... 请原谅一个很努力的在自学中的智商不好的孩子....[ Last edited by rebow on 2012-12-8 at 04:34 ] |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
rebow: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-08 09:47:07
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rebow: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-08 09:47:07
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首先，楼主最好找本比较基础的蛋白质相关教科书看看，这样你能有比较清楚地认识 BCA或者Bradford Assay是蛋白质定量法，这个定量是测定样品中有多少蛋白，譬如每毫升样品多少毫克之类，蛋白是具有活性的物质，在你研究他的功能之前，至少得先知道样品中有多少。 SDS-PAGE是将蛋白在聚丙烯酰胺凝胶中电泳，由于不同分子量大小的蛋白泳动速度不一，因此对照marker（就是一系列不同分子量蛋白）可以较粗略的估计分子量。如果要精确点的结果，就需要上质谱。 western blot即蛋白质印迹，是利用抗原抗体特异性反应鉴别蛋白的，譬如一份样品中有很多蛋白，但你想知道有没有某蛋白A，那么就找针对A某段序列的抗体，通过特异性反应，抗体与样品中蛋白A结合，在通过一定的二抗，就可以进行检测。 另外，你的连线正确 |
3楼2012-12-08 05:37:48
4楼2012-12-08 07:11:26
