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why0393

金虫 (正式写手)

[求助] 复苏培养杂交瘤细胞失败!!!

有没有做单抗的虫子?本实验室年前保存在液氮的的杂交瘤细胞现在怎么复苏都无法存活超过两天!细胞在瓶子里就是不长,而是慢慢的萎缩死亡。这是怎么回事?
PS:在保存的时候才发现保存用的血清是污染的血清。对复苏后的细胞离心清洗两次,外加双抗仍然无法存活。求高手指点
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why0393

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 华俊 at 2012-12-06 19:18:41
杂交瘤细胞复苏本来就是没有细胞系后复苏,也做杂交瘤细胞,并且遇到同样的问题,但是经过一段时间的摸索后来将细胞也全部复苏存活。
这个很大程度上是细胞冻存的问题,冻存液、冻存温度等等,很多实验室喜欢将细胞 ...

嗯,多谢多谢啊,接下来我会尝试一下

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2012-12-06 20:57:58
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yongliqin

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
why0393: 金币+10 2012-12-06 17:04:07
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与,欢迎常来 2012-12-07 08:06:25
你可以尝试一下在96孔板中复苏一下,待细胞长起来后在转回到瓶中,可能你本身活的细胞就不是很多,直接在瓶中复苏的话不容易活。
2楼2012-12-06 10:39:25
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love2412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
why0393: 金币+10 2012-12-06 17:06:08
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-12-07 08:06:42
刚复苏时的活性、密度是多少?要保证活细胞的密度。活性实在太低的话试下梯度离心分离活细胞,或者像2L说的那样用微孔板(还可以加滋养细胞)。至于污染问题,复苏初期影响不大的。
3楼2012-12-06 11:30:01
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why0393

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yongliqin at 2012-12-06 10:39:25
你可以尝试一下在96孔板中复苏一下,待细胞长起来后在转回到瓶中,可能你本身活的细胞就不是很多,直接在瓶中复苏的话不容易活。

嗯,正有此意!多谢多谢!
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4楼2012-12-06 17:03:59
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