7楼: Originally posted by huoyongting at 2012-12-04 17:13:48
才34bp，你直接用PCR的方法，把目的片段加在引物上，PCR扩增整个质粒，成功率非常高的，我前几天还做了一次，测序正确

8楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-12-04 21:49:11
LS很对哈，你才34bp那么小的片段不需要做连接加上的，直接把目的序列加在引物上，做PCR连上就好了，你这样太麻烦了呢

2楼: Originally posted by ls1988121 at 2012-12-04 10:52:16
质粒是单酶切还是双酶切？
如果是单酶切必须去磷酸化处理防止自连。
如果是双酶切，T4这一套是否有效，别人是否用过，因为buffer里含ATP，若buffer失效也会导致连接失败。
另外，也可能是PCR的问题，是否做了阳性 ...

2楼: Originally posted by ls1988121 at 2012-12-04 10:52:16
质粒是单酶切还是双酶切？
如果是单酶切必须去磷酸化处理防止自连。
如果是双酶切，T4这一套是否有效，别人是否用过，因为buffer里含ATP，若buffer失效也会导致连接失败。
另外，也可能是PCR的问题，是否做了阳性 ...