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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物稀释
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today521328

新虫 (初入文坛)

[交流] 引物稀释

请教高手：
    我的引物合成报告单上写的是OD值=2，nmol=5.25.请问如何稀释成10pmol/ul的浓度啊！步骤是怎么样的。
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1楼 2012-12-03 11:24:56
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
用525ul水溶解。计算是V=5.25×10-9/（10×10-12/10-6）=5.25×10-4(L)=525ul
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2楼2012-12-03 12:29:20
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普通回帖

today521328

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-03 12:29:20
用525ul水溶解。计算是V=5.25×10-9/（10×10-12/10-6）=5.25×10-4(L)=525ul

你好！
    能具体解释一下这个公式：V=5.25×10-9/（10×10-12/10-6）=5.25×10-4(L)=525ul吗？也就是各个数字都具体代表什么啊！谢谢！是不是加水的浓度是nmol数的100倍啊！比如，如果是3nmol的话就加300ul水啊！谢谢！
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3楼2012-12-03 12:37:49
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
一般加nmol数的10倍就是52.5ul先稀释成100uM作为母液，以后用再稀释成10uM的工作液用

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4楼2012-12-03 17:33:28
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
顶楼上。如果引物用量不是很大，还是建议先稀释为100的，取部分稀释为10的工作浓度，既可以避免反复冻融还可以防止污染。
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小鱼儿爱你啦
5楼2012-12-03 18:02:51
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neu234

木虫之王 (文学泰斗)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
帮顶
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6楼2012-12-03 19:32:16
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天空2011

铜虫 (小有名气)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-03 12:29:20
用525ul水溶解。计算是V=5.25×10-9/（10×10-12/10-6）=5.25×10-4(L)=525ul

是不是还要乘以2啊，他的事2OD!
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7楼2012-12-03 19:53:30
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
7楼: Originally posted by 天空2011 at 2012-12-03 19:53:30
是不是还要乘以2啊，他的事2OD!...

不用，看摩尔数。

你之前说的很对，简单点说，就是摩尔数乘以100就到了10uM (umol/L)，也就是10pmol/ul。

引物还是有可能会降解、污染，所以你先配成100uM的溶液保存，然后取一部分再稀释到10pmol/ul使用
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8楼2012-12-03 21:05:58
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
525微升水就行了。

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9楼2012-12-03 22:07:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by today521328 at 2012-12-03 12:37:49
你好！
    能具体解释一下这个公式：V=5.25×10-9/（10×10-12/10-6）=5.25×10-4(L)=525ul吗？也就是各个数字都具体代表什么啊！谢谢！是不是加水的浓度是nmol数的100倍啊！比如，如果是3nmol的话就加300ul水啊 ...

体积=摩尔数/摩尔浓度。5.25ng是DNA的总摩尔数，等于5.25×10-9摩尔。10pmol/ul是你要求的摩尔浓度。等于10×10-12mol/10-6L=10-5mol/L
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10楼2012-12-04 07:37:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 天空2011 at 2012-12-03 19:53:30
是不是还要乘以2啊，他的事2OD!...

不用。OD是吸光值，是合成引物数量的一个指标。如果你需要用质量体积浓度的话，要根据分子量来计算。你是用摩尔浓度，直接用摩尔数就可以了。
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11楼2012-12-04 07:49:31
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neway127

银虫 (正式写手)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
还有啊  华大引物的合成单上都有写清楚的。加多少水就稀释成了100um，保存用。然后稀释成工作浓度。
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12楼2012-12-04 08:51:48
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piaoyidetian

新虫 (初入文坛)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
报告单上应该有原有浓度的，按比例稀释就可以了

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13楼2012-12-04 12:00:30
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小鱼儿爱你啦

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by joan198108 at 2012-12-03 18:02:51
顶楼上。如果引物用量不是很大，还是建议先稀释为100的，取部分稀释为10的工作浓度，既可以避免反复冻融还可以防止污染。

如何稀释成100微摩尔的呢？

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15楼2016-04-11 22:04:07
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gdj36370204314楼
2012-12-05 16:19   回复  
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