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sunxin2012铜虫 (小有名气)
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[求助]
转基因筛选
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| 我想请问各位前辈，分化苗在培养基上是怎么筛选的，都是用Bar 基因与目的基因共转化然后用除草剂进行筛选吗？怎样提高筛选效率？谢谢哈 |
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sunxin2012
铜虫 (小有名气)
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5楼2012-12-06 16:16:39
【答案】应助回帖
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amisking: 金币+8, 鼓励新虫发帖交流，欢迎道生物医药区 2012-12-01 21:35:13
amisking: 回帖置顶 2012-12-01 21:35:16
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| 在转基因过程中，通常在表达载体上都有相应的筛选标记基因，比如说nptII（分解卡那霉素）、潮霉素抗性基因及除草剂抗性基因Bar等，构建表达载体就是将你的目的基因连接上去，所以目的基因及抗性基因是一个整体。然后将这个载体转入到农杆菌后通过侵染（植物中通常使用农杆菌侵染法）相应材料。就你提及的分化苗的筛选，我不知道你前期有没有做一些条件摸索，比如说合适的除草剂筛选压浓度、抑菌抗生素浓度。如果有的话，就将农杆菌侵染后的材料接种到含有合适浓度除草剂及抑菌抗生素的分化培养基中，每隔半个月~一个月换新的培养基进行筛选培养即可，到时候能长出的具有抗性的绿苗就是你的拟转基因苗，之后就是进一步的PCR验证及southern blot验证了。置于提高转化效率（不是筛选效率），可以从农杆菌的浓度、侵染时间，是否加乙酰丁香酮、外植体预培养时间这些因素中进行优化。 |
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sunxin20122楼2012-12-01 11:03:08
sunxin2012
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3楼2012-12-01 21:15:42
4楼2012-12-06 15:30:22