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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因筛选
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)

[求助] 转基因筛选

我想请问各位前辈，分化苗在培养基上是怎么筛选的，都是用Bar 基因与目的基因共转化然后用除草剂进行筛选吗？怎样提高筛选效率？谢谢哈
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Saveyourheartforsomeonewhocares.把心留给在乎你的人吧。
1楼 2012-12-01 10:21:15
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拉克曼

无虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+8, 鼓励新虫发帖交流，欢迎道生物医药区 2012-12-01 21:35:13
amisking: 回帖置顶 2012-12-01 21:35:16
在转基因过程中，通常在表达载体上都有相应的筛选标记基因，比如说nptII（分解卡那霉素）、潮霉素抗性基因及除草剂抗性基因Bar等，构建表达载体就是将你的目的基因连接上去，所以目的基因及抗性基因是一个整体。然后将这个载体转入到农杆菌后通过侵染（植物中通常使用农杆菌侵染法）相应材料。就你提及的分化苗的筛选，我不知道你前期有没有做一些条件摸索，比如说合适的除草剂筛选压浓度、抑菌抗生素浓度。如果有的话，就将农杆菌侵染后的材料接种到含有合适浓度除草剂及抑菌抗生素的分化培养基中，每隔半个月~一个月换新的培养基进行筛选培养即可，到时候能长出的具有抗性的绿苗就是你的拟转基因苗，之后就是进一步的PCR验证及southern blot验证了。置于提高转化效率（不是筛选效率），可以从农杆菌的浓度、侵染时间，是否加乙酰丁香酮、外植体预培养时间这些因素中进行优化。
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sunxin2012
生命源泉来源于执着
2楼2012-12-01 11:03:08
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 拉克曼 at 2012-12-01 11:03:08
在转基因过程中，通常在表达载体上都有相应的筛选标记基因，比如说nptII（分解卡那霉素）、潮霉素抗性基因及除草剂抗性基因Bar等，构建表达载体就是将你的目的基因连接上去，所以目的基因及抗性基因是一个整体。然后 ...

首先谢谢您的回复。再就是我用的是基因介导的，bar基因与目的基因是在两个不同的载体上，这样用除草剂进行筛选是不是不可靠啊？
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3楼2012-12-01 21:15:42
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scird

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你用的共转化。共转化的最高目标是获得光有功能基因没有筛选基因的转换株，所以，从分化筛选开始，培养基中都要加抗性筛选剂了。
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http://gmo.cnbabyup.com
4楼2012-12-06 15:30:22
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by scird at 2012-12-06 15:30:22
你用的共转化。共转化的最高目标是获得光有功能基因没有筛选基因的转换株，所以，从分化筛选开始，培养基中都要加抗性筛选剂了。

要是这样的话，理论上活下来的都含有bar基因，不一定含有目的基因。这种筛选方式是不是不合理？
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5楼2012-12-06 16:16:39
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拉克曼

无虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sunxin2012 at 2012-12-01 21:15:42
首先谢谢您的回复。再就是我用的是基因介导的，bar基因与目的基因是在两个不同的载体上，这样用除草剂进行筛选是不是不可靠啊？...

在不同载体上啊， 那确实很难保证你筛选的成功率哦
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生命源泉来源于执着
6楼2012-12-08 17:45:46
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拉克曼

无虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sunxin2012 at 2012-12-06 16:16:39
要是这样的话，理论上活下来的都含有bar基因，不一定含有目的基因。这种筛选方式是不是不合理？...

肯定不合理的，你自己都能想明白。bar在这里根本就没有发挥到作用，建议重新构建载体
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生命源泉来源于执着
7楼2012-12-08 17:47:41
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yysen2008

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

T1代直接培养基加PPT,这个应该做过了；T2以后直接播在盆里，苗期直接喷施PPT。
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8楼2012-12-18 15:22:22
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yysen2008 at 2012-12-18 15:22:22
T1代直接培养基加PPT,这个应该做过了；T2以后直接播在盆里，苗期直接喷施PPT。

PPT是什么东西？是针对什么的筛选剂？能不能说的具体点，谢谢
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9楼2012-12-18 19:34:59
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