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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 染色体步行法的接头制备
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125834359

新虫 (初入文坛)

[求助] 染色体步行法的接头制备

我是用连接介导的染色体步移法克隆启动子，然后里面有个步骤。
(2)接头的制备，将接头序列1和接头序列2(各50μM )在10xPCRbufer中95℃变性5min，然后转入70℃的水中，室温冷却，接着转入4℃下保持12 h，最后将制备好的接头贮存于一20℃备用。

然后10xPCRbufer是多少μL  还有70 是几分钟  有大神知道不？万分感谢
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1楼 2012-11-29 23:35:27
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我估计，你的接头是合成两条单链，然后需要先退火形成双链。 这个很简单的，简便的做法，就是按你说的接头序列1和接头序列2(各50μM )在10xPCRbufer中，然后EP管放沸水中变性5min,然后关掉明火，沸水自然冷却至室温，这时候双链退火成功，可以接下去实验了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-30 10:54:43
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damo8912

铜虫 (初入文坛)
楼主  你做出来了吗  你接头怎么制备的
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3楼2013-09-17 20:40:06
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