24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

混水小虫

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 843.5
帖子: 80
在线: 35.9小时
虫号: 1757509
注册: 2012-04-15
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 分步双酶切

对质粒进行Hind III 和Sal I双酶切，因两个酶切位点离的太近（中间10个bp），请问是否应该采用分步酶切啊？
还有就是如果采用双酶切，这两个酶的酶切顺序如何确定啊？
在第一次酶切后，是不是必须要进行去磷酸化处理？看到之前的帖子上，说关于分步酶切中间的纯化步骤中，很多同学都没有说去磷酸化处理这个环节，是不是这一环节可以省略啊？
纯化方法哪个较好些啊？有些同学说是要电泳再割胶回收，有的说不电泳直接乙醇沉淀法回收，也有的人说不电泳直接加入溶胶buffer，开始回收！
请熟知这一方面的大虾给点帮助吧！

回复此楼