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xiaohong1213

银虫 (初入文坛)

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[求助] 稀有密码子占多大比例，会影响重组基因的表达？

请大家帮忙啊，真核的一个基因在大肠杆菌中表达，诱导条件已经摸索了将近一个月了，温度，浓度，时间都尝试过了，就是不表达，是不是因为稀有密码子的原因而影响表达，经过一个软件的分析，在引物中有一个精氨酸的稀有密码子，其余位置也有一些稀有密码子，那到底稀有密码子存在多少，会影响到基因的表达？谢谢！

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1楼2012-11-29 10:57:41

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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

应助: 57 (初中生)
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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

通常我们做的时候，即使用软件分析有一些（10个左右的稀有密码子），也可以用E. coli BL21DE3正常表达，没有问题。如果你怀疑是稀有密码子的问题，那么可以如楼上所说，采用Rosetta试一下。
但是影响表达的条件很多，不仅仅是稀有密码子的问题。我认为，即使是稀有密码子影响了表达，大部分情况下也只是表达量很低，所以你就要先判断到底是表达很低还是真的完全不表达，不知道你有没有用western或者其它方法进行检测过？
如果是表达量低，当然可以优化表达条件。但是如果是完全不表达，就首先要从源头上，你的基因上面去找原因。载体构建的是否合理？基因本身是否容易形成高级结构等？这些都有可能影响表达。
其次，不知道你要表达的是什么蛋白。我们遇到过蛋白有毒性，因此按正常的方式去表达根本不行。
还有就是截断表达，有的在表达的过程中提前终止了。
暂时想到这么多了。