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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by chenguestc at 2012-11-29 15:23:25
是的。如果目的片段过长,可考虑用不同的酶切成几个CONTIG后再连接。
如果片段不长,那么可以考虑换一个连接试剂盒,重新回收DNA连接,全套都换新的,否则老是到处找原因也很难找的到。...

普通TAQ可以在PCR产物末端加A,因此没有什么特殊要求
11楼2012-11-30 14:10:10
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hxl4054

铁杆木虫 (知名作家)

薛定谔的喵星人

期待高人出没

俺不是这个专业的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

12楼2012-11-30 14:48:35
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xiefl1984

木虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lvye3707: 金币+5 2012-12-02 20:46:12
片段胶回收后纯化一下,注意要没有有机试剂的影响
13楼2012-11-30 16:48:43
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王文钊-

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lvye3707: 金币+5, 谢谢啊,我换个感受态试试 2012-12-02 20:47:10
lvye3707: 回帖置顶 2012-12-03 09:33:53
感觉可能是感受态有问题了,我们有时候用自己做的感受态也有问题,后来买了试剂公司的感受态,就做出来了。用过TAKARA的DH5a,还有全式金的trans-T1
14楼2012-11-30 20:39:54
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ym6104

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lvye3707: 金币+5, 有帮助, 可我的菌长啊,这可能是的?感受态怎么影响 2012-12-02 20:48:35
lvye3707: 回帖置顶 2012-12-03 09:33:57
之前也出现过楼主的这种情况,后来换成全式金的T1,就没出现过了。。。如果找不到其他原因的话,可以考虑换个感受态试试。。。
15楼2012-11-30 23:00:21
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lvye3707

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by hxl4054 at 2012-11-30 14:48:35
期待高人出没

俺不是这个专业的

谢谢支持
16楼2012-12-02 20:45:56
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小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lvye3707: 金币+5 2012-12-03 09:27:43
你的T载体盒子 是不是时间久了
生活是一面镜子,要笑着面对!
17楼2012-12-03 00:24:53
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lvye3707: 金币+5 2012-12-03 17:34:06
时间长短没什么大碍,按说明书上来就可以了,主要是摩尔浓度比是不是最佳比值 1:3或者1:5
18楼2012-12-03 10:25:04
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slk8349

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你PCR时候用的是什么没啊??是末端家A的吗?不然的话连不上T载体的啊!还有,你的目的片段是多大啊?要是打的话,你要选用高保真的酶,最后还要加一下rTaq,价格尾巴才行啊,不让连不上的
19楼2013-04-27 23:44:46
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yxliu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的片段是多大的呢?片段太长是不好连接。
20楼2013-11-01 16:38:04
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