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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的片段和pMD18-T simple vector 的连接
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by chenguestc at 2012-11-29 15:23:25
是的。如果目的片段过长，可考虑用不同的酶切成几个CONTIG后再连接。
如果片段不长，那么可以考虑换一个连接试剂盒，重新回收DNA连接，全套都换新的，否则老是到处找原因也很难找的到。...

普通TAQ可以在PCR产物末端加A，因此没有什么特殊要求
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11楼2012-11-30 14:10:10
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hxl4054

铁杆木虫 (知名作家)

薛定谔的喵星人
期待高人出没

俺不是这个专业的
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

lvye3707
12楼2012-11-30 14:48:35
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xiefl1984

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lvye3707: 金币+5 2012-12-02 20:46:12
片段胶回收后纯化一下，注意要没有有机试剂的影响
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13楼2012-11-30 16:48:43
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王文钊-

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lvye3707: 金币+5, 谢谢啊，我换个感受态试试 2012-12-02 20:47:10
lvye3707: 回帖置顶 2012-12-03 09:33:53
感觉可能是感受态有问题了，我们有时候用自己做的感受态也有问题，后来买了试剂公司的感受态，就做出来了。用过TAKARA的DH5a,还有全式金的trans-T1
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14楼2012-11-30 20:39:54
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ym6104

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lvye3707: 金币+5, ★有帮助, 可我的菌长啊，这可能是的？感受态怎么影响 2012-12-02 20:48:35
lvye3707: 回帖置顶 2012-12-03 09:33:57
之前也出现过楼主的这种情况，后来换成全式金的T1，就没出现过了。。。如果找不到其他原因的话，可以考虑换个感受态试试。。。
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15楼2012-11-30 23:00:21
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lvye3707

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by hxl4054 at 2012-11-30 14:48:35
期待高人出没

俺不是这个专业的

谢谢支持
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16楼2012-12-02 20:45:56
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小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lvye3707: 金币+5 2012-12-03 09:27:43
你的T载体盒子 是不是时间久了
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生活是一面镜子，要笑着面对！
17楼2012-12-03 00:24:53
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lvye3707: 金币+5 2012-12-03 17:34:06
时间长短没什么大碍，按说明书上来就可以了，主要是摩尔浓度比是不是最佳比值 1:3或者1:5
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18楼2012-12-03 10:25:04
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slk8349

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你PCR时候用的是什么没啊？？是末端家A的吗？不然的话连不上T载体的啊！还有，你的目的片段是多大啊？要是打的话，你要选用高保真的酶，最后还要加一下rTaq，价格尾巴才行啊，不让连不上的
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19楼2013-04-27 23:44:46
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yxliu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的片段是多大的呢？片段太长是不好连接。
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20楼2013-11-01 16:38:04
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