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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 哪里可以查植物基因组DNA大小及相关信息
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CXL19880406

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
下雨的傍晚: 金币+5, ★★★很有帮助, 耐心的帮我解答问题 2012-11-28 11:55:40
引用回帖:
10楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-27 11:04:47
,真的很高兴啊，你做过就可以教教我了！我是学药的，对这些一点都不懂，现在是还在摸索提DNA阶段，提了有快两周了，一直提不好啊，帮我分析分析呗！是用的改良CTAB法。想知道总基因是跑电泳时不知道哪个是， ...

图1最亮的那个应该是，最下面那一行条带不是吧，我没出过这样的结果。不知道你这6个样品是不是相同质量的，怎么前3个和后3个差那么多。我用的上海生工的试剂盒提的，先把原理搞透可以适当对试剂盒的步骤进行改良，拖尾降解一些没关系，毕竟后面要设计引物只扩增你想要的东西就行了。图2没看懂啊……
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下雨的傍晚
11楼2012-11-27 11:16:33
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by CXL19880406 at 2012-11-27 11:16:33
图1最亮的那个应该是，最下面那一行条带不是吧，我没出过这样的结果。不知道你这6个样品是不是相同质量的，怎么前3个和后3个差那么多。我用的上海生工的试剂盒提的，先把原理搞透可以适当对试剂盒的步骤进行改良， ...

图1 ，是两个样品，是用CTAB法做的，没有用试剂盒！我现在提的都没信心了。那你可以跟我讲讲你们做的过程吗以及要提到怎么个程度就可以了？是1,提DNA 2,MSAP双酶切体 3，MSAP预扩增体系 4，MSAP,选择性扩增体系这只是我知道的大概，很多细节我都不知道，麻烦介绍几篇有关MSAP的综述让我了解呗！我非常感谢！
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haha
12楼2012-11-27 11:28:46
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CXL19880406

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

只留图1的亮带就行，稍微拖尾没关系。具体步骤也太多了，没法跟你说啊，大概就是裂解，除RNA，回BUFFER PP（忘了什么作用了），异丙醇沉降，乙醇洗涤。文章的话网上有很多啊，中国知网最简单的，我们一般用的是NCBI,springerlink和sciencedirect（老师不让看中文），搜MSAP肯定有
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13楼2012-11-27 11:57:02
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by CXL19880406 at 2012-11-27 11:57:02
只留图1的亮带就行，稍微拖尾没关系。具体步骤也太多了，没法跟你说啊，大概就是裂解，除RNA，回BUFFER PP（忘了什么作用了），异丙醇沉降，乙醇洗涤。文章的话网上有很多啊，中国知网最简单的，我们一般用的是NCBI ...

在知网里查过，但是很有限！那我就只好硬着头皮看外文了！对了你们用的接头和引物是什么，可否告知呢？
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haha
14楼2012-11-27 16:45:24
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by CXL19880406 at 2012-11-27 11:57:02
只留图1的亮带就行，稍微拖尾没关系。具体步骤也太多了，没法跟你说啊，大概就是裂解，除RNA，回BUFFER PP（忘了什么作用了），异丙醇沉降，乙醇洗涤。文章的话网上有很多啊，中国知网最简单的，我们一般用的是NCBI ...

帮忙看一下我提取的步骤呗！
1，称0.2-0.5g叶于预冷的研钵中快速研磨（研磨中加有10mg左右的PVP），研细后加入1ml的提取缓冲液（100mmol/l Tris-Hcl,50mmol/ledta,700mmol/lNacl,2%巯基乙醇，2%PVP）摇匀，在冰上静置10min.
2,取出离心管5000r/min 10min,去上清，加1ml预热的裂解缓冲液（100mmol/l Tris-Hcl,20mmol/ledta,1.4mol/lNacl,2%巯基乙醇,2%PVP,4%CTAB）混匀，于65度水浴锅中水浴1h,期间轻轻颠倒混匀数次。
3，取出离心管冷却至室温，12000r/mim 10min离心。
4，将上清转入新的离心管中加等体积的氯仿/异戊醇混匀，12000r/mim 10min离心。
5，去上清加等体积的酚/氯仿/异戊醇,混匀，12000r/mim 10min离心。
6，将上清转入新的离心管中加等体积的氯仿/异戊醇混匀，12000r/mim 10min离心。
7，取上清，加入100ul5mol/lNacl,再加2倍体积预冷的无水乙醇，颠倒混匀。放入-20度冰箱静止30min后，12000r/mim 10min离心。
8，沉淀用70%，及无水乙醇各洗两次，各10min 左右。
9，风干后加TE溶解！
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haha
15楼2012-11-27 17:05:10
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CXL19880406

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我没做第一步，我研磨后直接加裂解液置于冰上，等所有样品都研磨完以后一起水浴裂解，隔10分钟振荡一次使其充分裂解；另外我用的是异丙醇沉降，乙醇洗的。因为我的样品少，我沉降2个小时，有些降解，但是提出的效果还是挺好的。之前的那些试剂因为是跟试剂盒走的，所以不敢乱说。希望对你有帮助～
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下雨的傍晚
16楼2012-11-28 09:06:27
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by CXL19880406 at 2012-11-28 09:06:27
我没做第一步，我研磨后直接加裂解液置于冰上，等所有样品都研磨完以后一起水浴裂解，隔10分钟振荡一次使其充分裂解；另外我用的是异丙醇沉降，乙醇洗的。因为我的样品少，我沉降2个小时，有些降解，但是提出的效果 ...

那你们的DNA中如果有RNA的话会影响吗？还是一定要除去？
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haha
17楼2012-11-28 09:43:09
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CXL19880406

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

嗯，加RNA酶处理过了，不然OD值差太多
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下雨的傍晚
18楼2012-11-28 09:54:23
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by CXL19880406 at 2012-11-28 09:54:23
嗯，加RNA酶处理过了，不然OD值差太多

我DNA 得至少放3-4个月，后续摸条件而且有24个样品，加RNA酶对后面的DNA会有影响吗？
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haha
19楼2012-11-28 10:40:14
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CXL19880406

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-28 10:40:14
我DNA 得至少放3-4个月，后续摸条件而且有24个样品，加RNA酶对后面的DNA会有影响吗？...

不会。DNA原液储存，可取出少量稀释配成工作液备常用。
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下雨的傍晚
20楼2012-11-28 11:03:22
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