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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 亲和层析 已有4人参与

如何提高亲和柱子的吸附 我想提高一下带组氨酸标签的目的蛋白的吸附
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1楼 2012-11-26 14:44:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-11-27 11:07:40
我的目的蛋白现在20mM咪唑的结合液洗杂蛋白时，目的蛋白也洗来了，10mM能全部挂上柱，但是在7万（目的蛋白10000）那有杂带，如何让我的蛋白和柱子结合牢一点，超过20mM也不会不我的蛋白洗下来，洗脱时可以分阶段， ...

20mM一般是能洗下来少许His-tagged蛋白，不过要看你的目的了。一般是希望得到更纯的产物，损失一点产物也没什么太大关系吧。如果你觉得用20mM咪唑下来的目的蛋白太多，可以在binding buffer里面直接加15mM咪唑，样品也是，然后用15mM咪唑洗，多洗（10-15柱身体积）能够尽量把非特异结合的去掉，然后再用高浓度咪唑elute，收集。
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10楼2012-11-27 11:51:07
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
降低杂蛋白的含量就行了，哈哈哈
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2楼2012-11-26 15:35:05
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-11-26 15:35:05
降低杂蛋白的含量就行了，哈哈哈

不懂 滚一边去 上亲和柱子 就是为了除杂蛋白 我说的是提高目的蛋白的吸附 降低杂蛋白的挂柱吸附
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3楼2012-11-26 16:32:04
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dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-11-26 16:32:04
不懂 滚一边去 上亲和柱子 就是为了除杂蛋白 我说的是提高目的蛋白的吸附 降低杂蛋白的挂柱吸附...

你怎么骂人呢？
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4楼2012-11-26 17:04:16
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