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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 亲和层析 已有4人参与

如何提高亲和柱子的吸附 我想提高一下带组氨酸标签的目的蛋白的吸附
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-11-27 11:07:40
我的目的蛋白现在20mM咪唑的结合液洗杂蛋白时,目的蛋白也洗来了,10mM能全部挂上柱,但是在7万(目的蛋白10000)那有杂带,如何让我的蛋白和柱子结合牢一点,超过20mM也不会不我的蛋白洗下来,洗脱时可以分阶段, ...

20mM一般是能洗下来少许His-tagged蛋白,不过要看你的目的了。一般是希望得到更纯的产物,损失一点产物也没什么太大关系吧。如果你觉得用20mM咪唑下来的目的蛋白太多,可以在binding buffer里面直接加15mM咪唑,样品也是,然后用15mM咪唑洗,多洗(10-15柱身体积)能够尽量把非特异结合的去掉,然后再用高浓度咪唑elute,收集。
10楼2012-11-27 11:51:07
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dshlove

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
降低杂蛋白的含量就行了,哈哈哈
2楼2012-11-26 15:35:05
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-11-26 15:35:05
降低杂蛋白的含量就行了,哈哈哈

不懂 滚一边去 上亲和柱子 就是为了除杂蛋白 我说的是提高目的蛋白的吸附 降低杂蛋白的挂柱吸附
3楼2012-11-26 16:32:04
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dshlove

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-11-26 16:32:04
不懂 滚一边去 上亲和柱子 就是为了除杂蛋白 我说的是提高目的蛋白的吸附 降低杂蛋白的挂柱吸附...

你怎么骂人呢?
4楼2012-11-26 17:04:16
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