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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » QPCR
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] QPCR

我原来是食品专业的，现在研究生课题主要研究杨梅花色苷合成酶基因的表达，比较不同成熟度花色苷合成酶基因表达丰度的区别
我进行了QPCR实验，以ACT基因为内标，用2-ΔCt计算相对强度，结果发现不同品种间的差异是有的，但是与相关文章比较，我的相对强度的值比别人小了2个数量级，不明白原因是什么，我测的ACT的CT值是25左右，我在想会不会是ACT的问题。。。麻烦高手指教下 啊
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1楼 2012-11-23 11:02:33
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+1 2012-11-23 20:05:35
不同人做同一个实验数据不可能没有差距，我个人觉得能反应趋势就可以了。而且，有些论文为了突出差异，可能数据也并不真实。
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4楼2012-11-23 19:34:25
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第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+2 2012-11-23 14:22:38
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-24 13:40:03
ACT是有影响的，在不同的生理阶段或不同的处理下，ACT不可能是始终恒定的，所以在选择看家基因的时候要考虑好。你的相对强度比别人小有可能是你们用的材料或者是处理不同所致的，我觉得只要能反映规律就好。
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勤勉
2楼2012-11-23 12:56:46
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 第五平原 at 2012-11-23 12:56:46
ACT是有影响的，在不同的生理阶段或不同的处理下，ACT不可能是始终恒定的，所以在选择看家基因的时候要考虑好。你的相对强度比别人小有可能是你们用的材料或者是处理不同所致的，我觉得只要能反映规律就好。

是么？可是我的目的基因与ACT基本表达量相等了，所以比值实在太小
别人也是做杨梅做的看家基因也是ACT，比值却相差这么的大。。。。
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3楼2012-11-23 14:28:42
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