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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用RAW246.7做抗炎实验，LPS为什么一直刺激不出来？
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嗜血之魂

金虫 (正式写手)

[交流] 用RAW246.7做抗炎实验，LPS为什么一直刺激不出来？ 已有2人参与

最近在做抗炎实验，用的是小鼠单核巨噬细胞RAW 246.7，用1640培养基培养，然后用96孔板接板50000个/孔，但是做LPS梯度都没有刺激出来，不知道是为什么。
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嗜血之虫
1楼 2012-11-21 09:27:38
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嗜血之魂

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by henryxue at 2012-11-21 21:05:32
尝试一下无血清的饥饿

嗯，这个目前还没有做过。饥饿处理以后是不是细胞的状态后会比较一致？
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嗜血之虫
4楼2012-11-22 23:25:47
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嗜血之魂

金虫 (正式写手)
2楼2012-11-21 14:25:28
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henryxue

木虫 (小有名气)
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尝试一下无血清的饥饿
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3楼2012-11-21 21:05:32
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henryxue

木虫 (小有名气)
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主要是如果细胞系用完全培养基培养时，可能处于一种活化的状态，导致后续的刺激的效应较弱
另外注意一下LPS是不是还是有效，那个东西根据一些Datasheet描述在浓度低于1mg/mL的时候容易吸附管壁
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5楼2012-11-23 07:52:55
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嗜血之魂

金虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by henryxue at 2012-11-23 07:52:55
主要是如果细胞系用完全培养基培养时，可能处于一种活化的状态，导致后续的刺激的效应较弱
另外注意一下LPS是不是还是有效，那个东西根据一些Datasheet描述在浓度低于1mg/mL的时候容易吸附管壁

谢谢你！LPS是新买的，sigma的。分装的时候是用PBS配成5mg/ml的储备液，用的时候再稀释。另外我想问一下，我用的是1640的培养基，酚红会不会对结果有影响？
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嗜血之虫
6楼2012-11-23 11:43:17
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henryxue

木虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 嗜血之魂 at 2012-11-23 11:43:17
谢谢你！LPS是新买的，sigma的。分装的时候是用PBS配成5mg/ml的储备液，用的时候再稀释。另外我想问一下，我用的是1640的培养基，酚红会不会对结果有影响？...

应该不会，我都用的带酚红的
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7楼2012-11-23 12:47:37
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henryxue

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 嗜血之魂 at 2012-11-23 11:43:17
谢谢你！LPS是新买的，sigma的。分装的时候是用PBS配成5mg/ml的储备液，用的时候再稀释。另外我想问一下，我用的是1640的培养基，酚红会不会对结果有影响？...

突然想到，sigma的LPS有很多种，每种的target细胞效应可能会有所差别，在datasheet里写得都比较清楚，你可以参阅一下
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8楼2012-11-23 12:48:47
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嗜血之魂

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by henryxue at 2012-11-23 12:48:47
突然想到，sigma的LPS有很多种，每种的target细胞效应可能会有所差别，在datasheet里写得都比较清楚，你可以参阅一下...

我用的LPS是 055：B5,我看论坛上很多人也是用这个的。你做的时候LPS是怎么处理的？
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嗜血之虫
9楼2012-11-23 17:08:21
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henryxue

木虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 嗜血之魂 at 2012-11-23 17:08:21
我用的LPS是 055：B5,我看论坛上很多人也是用这个的。你做的时候LPS是怎么处理的？...

我们用的也是这个，直接往培液里加
我们做的原代，100ng-1ug/mL的使用浓度，细胞系的没有试过
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10楼2012-11-23 22:20:53
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