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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 测序送样
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 添翼如虎 at 2012-11-20 10:21:29
我用之前的引物重新扩增了一下菌液，发现条带和以前一样，这样能说明是阳性克隆吗？有的文献上用EcoR1做了酶切来确定阳性克隆，这个酶切是干什么的？...

酶切是确定载体上真的连接了目的序列，因为PCR是有很多假阳性的。
如果经费不限的话，可以挑几个阳性的送测序。如果不行的话，要提取质粒，做酶切之后跑胶看看有没有目的片段。
至于选什么酶切位点，可以看看载体上的酶切位点，再看看目的序列上有没有相应的，如果没有才可以用。
不过我一般都不切，送测序才20块一个反应，提质粒酶切跑胶的成本都不止了。
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你的日子如何，你的力量也必如何！
11楼2012-11-20 11:25:47
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添翼如虎

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-20 11:25:47
酶切是确定载体上真的连接了目的序列，因为PCR是有很多假阳性的。
如果经费不限的话，可以挑几个阳性的送测序。如果不行的话，要提取质粒，做酶切之后跑胶看看有没有目的片段。
至于选什么酶切位点，可以看看载体 ...

好的，谢谢
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12楼2012-11-21 12:37:25
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