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758836596铜虫 (初入文坛)
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蛋白刺激RAW264.7，Elisa检测TNF-α的释放
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| 我用蛋白刺激RAW264.7，24h之后Elisa检测TNF-α的释放，结果发现阴性对照也就是只往细胞里加PBS而不加蛋白刺激，竟然可以检测到大量的TNF-α的释放，请做过这种实验的老师给指导一下吧，谢谢了！我培养细胞的培养基里面加入了血清，会不会是因为这个原因啊？跟细胞的状态有关系吗？或者是和铺板的细胞数太多有关系？ |
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758836596
铜虫 (初入文坛)
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我觉得问题是这样的： 1 你先检测一下PBS和培养基，里面是不是含有内毒素，这个可以用鲎试剂检测，市面上卖的很多，不贵，大约100元/盒吧。因为RAW264.7 对内毒素（LPS）比较敏感，我们实验室原来做的时候都是用内毒素-free的水； 2 铺板的时候，细胞数量很重要的，太多了有死细胞也会引起培养体系的改变，导致内源性的TNF增多； 3 可以铺板的时候用正常量的血清，随后贴壁好，换用无血清的培养基饥饿一段，我们叫同步化，使细胞都处于同一个细胞周期，这样背景比较均一，这个在细胞周期试验中比较常用。 4 剩下的就是实验操作过程中的细心了。不可能对照组比处理组都高，还是哪些细节没有注意到吧。 |
5楼2012-11-20 18:40:18
