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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] PCR是否要扩增出所有碱基？不多不少，也不突变？

PCR出基因后欲稳定转染进入细胞，是否要扩增出所有碱基？不多不少，也不突变？
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1楼 2012-11-16 22:43:26
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gyesang

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【答案】应助回帖

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1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-11-17 10:02:12
是的，这个在构建载体之前设计好，用高保真酶扩增，不会出现多，少或者突变这种情况，一定要是一样的序列，考虑SNP，才能开始做实验，否则实验结果你没有办法解释，除非你就像看突变效应
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2楼2012-11-16 22:56:38
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

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1949stone: 金币+2, 鼓励 2012-11-17 10:02:25
yuguiyan: 金币+1 2012-11-28 19:56:49
我觉得看你后续做什么实验，如果是让这段基因表达蛋白的话，那你就不能改变它的阅读框；如果仅仅是P出来构建载体然后转染，考察其对其他基因的影响的话可以突变一些没问题，只要到时候Blast的时候是你要的基因就行。。。。。。
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keepon
3楼2012-11-17 08:57:39
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