24小时热门版块排行榜    

查看: 1697  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

aaaapple

铁虫 (初入文坛)

[求助] 基因的下半部分已经测序完成,引物设计了两次上半部分总是扩不出来是什么原因?

我已经扩出了鲤鱼STAT6下半部分的基因,与鲑鱼STAT6的相似性是百分之八十四,利用已经扩出的片段设计引物,可是设计了两次还是无法扩出上游的片段。已经做了几个星期了,还是没得结果。不知道出了什么问题。是不是测序所得的序列根本不是STAT6的基因呢?或者是不是有其他原因导致无法扩出,新手金币不多,希望高手能指点一二!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋雨心寒

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1200bp测序是可以,但是效果会很不好。建议你可以考虑一下巢氏PCR,把基因前后多拿点下来,然后分段PCR扩增测序。
8楼2012-11-19 10:30:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
aaaapple: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-19 10:15:34
原因有很多啊。 引物位置和结合问题、是否存在高GC含量区域、高级结构、试剂污染、DNA降解等等。设计对照,一个个排除原因吧。
2楼2012-11-17 14:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
aaaapple: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-19 10:17:38
你用下游序列设计引物不可能扩增出上游序列。而一般要在这个基因上游的保守区设计简并引物。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-11-18 10:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
aaaapple: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 很有帮助谢谢! 2012-11-19 10:11:22
你这个情况不要再普通pcr了,如果STAT6不是特别长的话,直接5'race和3'race,目的应该是拿全长吧,再扩也是浪费时间
4楼2012-11-18 18:41:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 理学,工学,农学调剂,少走弯路,这里欢迎您! +3 likeihood 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:44 by likeihood
[考研] 290求调剂 +6 ErMiao1020 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:14 by lature00
[考研] 282求调剂 +4 2103240126 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:07 by 2103240126
[考研] 299求调剂 +4 kkcoco25 2026-03-02 4/200 2026-03-02 18:04 by barlinike
[考研] 289求调剂 +3 BrightLL 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:28 by 杨杨杨紫
[考研] 0703 总分319求调剂 +3 Xinyuu 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:20 by houyaoxu
[考研] 化工京区271求调剂 +5 11ing 2026-03-02 5/250 2026-03-02 17:16 by houyaoxu
[考研] 272求调剂 +7 材紫有化 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:48 by 无际的草原
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:46 by 无际的草原
[考研] 276求调剂 +4 路lyh123 2026-02-28 5/250 2026-03-02 11:20 by yuchj
[考研] 295求调剂 +8 19171856320 2026-02-28 8/400 2026-03-02 11:19 by yuchj
[考研] 281求调剂 +5 2026计算机_诚心 2026-03-01 8/400 2026-03-02 11:05 by 汪!?!
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 材料复试调剂 +4 学材料的点 2026-03-01 5/250 2026-03-02 08:26 by houyaoxu
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
信息提示
请填处理意见