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aaaapple

铁虫 (初入文坛)

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虫号: 1952591
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性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 基因的下半部分已经测序完成，引物设计了两次上半部分总是扩不出来是什么原因？

我已经扩出了鲤鱼STAT6下半部分的基因，与鲑鱼STAT6的相似性是百分之八十四，利用已经扩出的片段设计引物，可是设计了两次还是无法扩出上游的片段。已经做了几个星期了，还是没得结果。不知道出了什么问题。是不是测序所得的序列根本不是STAT6的基因呢？或者是不是有其他原因导致无法扩出，新手金币不多，希望高手能指点一二！

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1楼2012-11-16 13:43:31

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铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

8楼: Originally posted by 秋雨心寒 at 2012-11-19 10:30:37
1200bp测序是可以，但是效果会很不好。建议你可以考虑一下巢氏PCR，把基因前后多拿点下来，然后分段PCR扩增测序。

STAT6 这个基因1600左右，我分成两段分别设计引物，第一段1200.第二段600，现在已经拿到600的了，我利用下面的600重新设计了两次下游的引物，但是居然一点反应都没得。
如果现在就做RACE 我怕引物都不好设计类，还有测序只能测750左右，所以现在做RACE怕不太合适，而且还不知道1600前面还有多少碱基。