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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 关于圆二或红外测定蛋白结构的问题，烦请大家指正，谢谢
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

火星驻地球联络处主任科员

优秀区长优秀版主优秀版主

[求助] 关于圆二或红外测定蛋白结构的问题，烦请大家指正，谢谢

我采用有机溶剂纯化一种蛋白 因此比较担心有机溶剂是否对蛋白结构造成影响 所以想通过红外或者圆二对蛋白结构进行观察
但是问题是
第一 我有机溶剂提取后 蛋白纯度有了较大的提高 但是通过电泳发现 主要有两种蛋白 因为不是纯品 是不是观察不到相应结构？
第二 我在sigma买了相应的的蛋白产品 但是电泳发现 sigma的产品混有其它的蛋白 并且可能是4-5种蛋白 这是不是也不能作为我的样品参照？
如果可以操作区分，或者有其它可操作方法，烦请告知，谢谢
试验证明活性基本没有受到有机溶剂影响
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太胖了！~
1楼 2012-11-14 10:16:24
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lezai945

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hsd3521: 金币+1, ★有帮助, 您好，感谢您的帮助，但是我的重点是结构测试，非纯化，谢谢 2012-11-14 18:45:27
想纯化蛋白，却又想最大范围的保留其结构活性。这个问题需要具体看你的实验目的是什么了。如果你的目的是为了分析其结构或者活性而去提取纯化，建议用比较柔和的方法去提取纯化，过柱子（具体什么柱子，你可以自己考虑）可以考虑一下，这样得到的蛋白纯度高，活性保留的也很好，但是不足的是：这样得到的蛋白操作比较繁琐，难度也很高，得到的纯品的量也是非常少。其他离心、透析、超滤、沉淀等方法，都不能得到高纯度的蛋白，活性的意义也不是太大（因为不是单一高纯度的蛋白或多肽）。建议多看看文献（包括英文文献）。蛋白类的文献特别特别多，而且蛋白纯化技术也比较成熟。
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2楼2012-11-14 10:39:10
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ZUSTleeds

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hsd3521: 金币+2, ★★★很有帮助, 感谢您的回复，谢谢，sigma的样品还不如我自己做的，这点sigma公司已经承认了我的实验结果，但是拒绝承认自己产品问题，很头疼 2012-11-16 08:19:27
尽可能提纯，增加纯化步骤。
不纯的蛋白质，用CD和IR是没有意义的。
有点奇怪，你购买的SIGMA不是纯品吗？还是你的目标蛋白目前还没有商品化纯品？4、5个条带，并不一定就是4、5种蛋白，可能有4级结构的。
如果实在没办法，看电泳后分离效果好坏。电泳分得开的话，就电泳后割胶，再测定吧。
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3楼2012-11-16 04:37:10
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