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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 做单克隆测序是菌液好还是菌液PCR后测好?
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zxy664063437

新虫 (初入文坛)

[求助] 做单克隆测序是菌液好还是菌液PCR后测好?

我扩增一个序列，做克隆，是直接用菌液测序好呢还是用菌液PCR后测好啊？请求指点
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1楼 2012-11-13 20:46:09
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kingleo99

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还是送菌液PCR产物吧，我们多年的经验告诉我们每次送去的菌液他们都说不行提不出质粒或者浓度太低等等问题。PCR产物就没啥问题。
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科学就是发现规律，而规律是上帝创造的，认识独一上帝就是智慧。
8楼2012-11-16 16:55:41
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天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉还是菌液好，pcr只做为初步的验证，里面的成分还有可能影响测序结果，还有就是量的问题，反正送公司他们给做了，自己又不麻烦，还是送菌液好点
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2楼2012-11-13 23:37:25
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
既然你要做克隆，还是把基因片段先连在T载体上，测序是还是用菌液送样，因为PCR产物送样有时候测序结果可能不太好，或者在PCR产物中某些序列是发生突变的，这样测出的结果不一定正确（虽然这样的事情发生的几率比较低）
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转向地质微生物学
3楼2012-11-14 09:56:41
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zxy664063437

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liujianmin68 at 2012-11-14 09:56:41
既然你要做克隆，还是把基因片段先连在T载体上，测序是还是用菌液送样，因为PCR产物送样有时候测序结果可能不太好，或者在PCR产物中某些序列是发生突变的，这样测出的结果不一定正确（虽然这样的事情发生的几率比较 ...

可是我送的菌液，人家说浓度低，很多都测不出来，送PCR的话一次就测出来了，下次我再试试
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4楼2012-11-15 12:00:16
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