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jemir

新虫 (著名写手)

[交流] 2800bp序列测序问题 已有2人参与

我想测序人的一个基因的编码序列,mRNA大概2800bp,请问(1)提RNA, 反转录成cDNA后,需要连到T载体上吗?反转录的得到的PCR 产物末尾有A吗,可以和T载体脸上吗?
(2)2800bp长的序列需要设计多少引物才能测通。
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gaoyang636

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你打算怎么克隆,RACE么?
不过我有个疑问,能不能说一下克隆它的目的? 我觉得人的基因信息基本都搞清了呀,你是要做多态性么?
2楼2012-11-14 08:34:52
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议连到载体上,这样双向测序就省了一对引物且利于后面的操作。连到T载体双向测序能够得到大约1600bp左右的长度,这样应该还要再合成一对引物才能测通。
3楼2012-11-14 08:54:27
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jemir

新虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-11-14 08:34:52
你打算怎么克隆,RACE么?
不过我有个疑问,能不能说一下克隆它的目的? 我觉得人的基因信息基本都搞清了呀,你是要做多态性么?

我不做克隆,我只是想知道我的样品里是不是有突变,所以打算测序后与genebank里正常人得序列作对比,看我的样品是否突变
4楼2012-11-14 20:07:59
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