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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 2800bp序列测序问题
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jemir

新虫 (著名写手)

[交流] 2800bp序列测序问题 已有2人参与

我想测序人的一个基因的编码序列，mRNA大概2800bp，请问（1）提RNA, 反转录成cDNA后，需要连到T载体上吗？反转录的得到的PCR 产物末尾有A吗，可以和T载体脸上吗？
（2）2800bp长的序列需要设计多少引物才能测通。
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1楼 2012-11-13 20:02:16
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你打算怎么克隆，RACE么？
不过我有个疑问，能不能说一下克隆它的目的？ 我觉得人的基因信息基本都搞清了呀，你是要做多态性么？
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2楼2012-11-14 08:34:52
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议连到载体上，这样双向测序就省了一对引物且利于后面的操作。连到T载体双向测序能够得到大约1600bp左右的长度，这样应该还要再合成一对引物才能测通。
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3楼2012-11-14 08:54:27
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jemir

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-11-14 08:34:52
你打算怎么克隆，RACE么？
不过我有个疑问，能不能说一下克隆它的目的？ 我觉得人的基因信息基本都搞清了呀，你是要做多态性么？

我不做克隆，我只是想知道我的样品里是不是有突变，所以打算测序后与genebank里正常人得序列作对比，看我的样品是否突变
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4楼2012-11-14 20:07:59
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