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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » HPLC分离未知物质。
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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)

[求助] HPLC分离未知物质。

哪位高手指点一下，我有一种微生物发酵的未知的物质，想用高效分离出来。以前从没做过，也没有人带我，请问实验方案应该怎么制定呢。越详越好了。谢了！！！
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人要靠自己
1楼 2012-11-10 21:09:45
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reilon

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-11-12 18:37:45
高效。。。好像挺难的吧 用制备或者半制备液相呗
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2楼2012-11-11 14:44:16
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zjl01234

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-11-12 18:37:51
先摸清极性，酸碱性，稳定性，最大吸收波长等性质，初步建立定性定量方法；发酵液组分复杂，建议先用TLC摸摸有多少组分，目标组分是几个，并且还能摸索下较好的展开剂系统，便于在此基础上摸索HPLC流动相系统；最后上HPLC前发酵液还得处理，确定正相还是反相柱，选好摸流动相所需的溶剂，接着就不断调比例直到主峰峰形好，与杂峰分开。做TLC各个点分的较好的话可把目标组分刮下溶解，再上HPLC就能知道主峰保留时间，量多的话还能做一个相对标准曲线定量

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-11-12 15:31:29
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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zjl01234 at 2012-11-12 15:31:29
先摸清极性，酸碱性，稳定性，最大吸收波长等性质，初步建立定性定量方法；发酵液组分复杂，建议先用TLC摸摸有多少组分，目标组分是几个，并且还能摸索下较好的展开剂系统，便于在此基础上摸索HPLC流动相系统；最后 ...

哦。非常感谢！！！我试着做一下...如果有问题还需要麻烦你...
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人要靠自己
4楼2012-11-12 17:36:32
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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by reilon at 2012-11-11 14:44:16
高效。。。好像挺难的吧 用制备或者半制备液相呗

但是我老板要我做HPLC啊！要用制备型的先要用分析级的做，摸索一下条件...我以前没用过，所以问一下各位大侠。
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人要靠自己
5楼2012-11-12 17:46:54
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小狼851226

木虫 (正式写手)
可以先看看紫外吸收情况。尝试摸索一下爬板条件。考察样品溶解性情况。选择简单的液质摸索，初步判断样品成份。选择一个比较合适的液相分离条件。验证，检测。---仅供参考。
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6楼2012-11-13 10:37:38
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HSCCC-tauto

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以尝试一下高速逆流色谱（HSCCC） 一次有效分离多种物质
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7楼2012-11-14 14:57:19
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reilon

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zfgtianya at 2012-11-12 17:46:54
但是我老板要我做HPLC啊！要用制备型的先要用分析级的做，摸索一下条件...我以前没用过，所以问一下各位大侠。...

你老板可以啊 怎么想用hplc 制备和分析的分离效果差别非常大 你就直接摸索制备就ok啦
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8楼2012-11-14 20:57:51
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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by HSCCC-tauto at 2012-11-14 14:57:19
可以尝试一下高速逆流色谱（HSCCC） 一次有效分离多种物质

高速逆流色谱？直接没用过。仪器都没得哟
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人要靠自己
9楼2012-11-16 15:58:17
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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by reilon at 2012-11-14 20:57:51
你老板可以啊 怎么想用hplc 制备和分析的分离效果差别非常大 你就直接摸索制备就ok啦...

嗯，我现在也在试着摸索呢。。。
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人要靠自己
10楼2012-11-16 15:58:49
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