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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)

[求助] HPLC分离未知物质。

哪位高手指点一下,我有一种微生物发酵的未知的物质,想用高效分离出来。以前从没做过,也没有人带我,请问实验方案应该怎么制定呢。越详越好了。谢了!!!
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人要靠自己
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reilon

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-11-12 18:37:45
高效。。。好像挺难的吧 用制备或者半制备液相呗
2楼2012-11-11 14:44:16
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zjl01234

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-11-12 18:37:51
先摸清极性,酸碱性,稳定性,最大吸收波长等性质,初步建立定性定量方法;发酵液组分复杂,建议先用TLC摸摸有多少组分,目标组分是几个,并且还能摸索下较好的展开剂系统,便于在此基础上摸索HPLC流动相系统;最后上HPLC前发酵液还得处理,确定正相还是反相柱,选好摸流动相所需的溶剂,接着就不断调比例直到主峰峰形好,与杂峰分开。做TLC各个点分的较好的话可把目标组分刮下溶解,再上HPLC就能知道主峰保留时间,量多的话还能做一个相对标准曲线定量

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-11-12 15:31:29
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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zjl01234 at 2012-11-12 15:31:29
先摸清极性,酸碱性,稳定性,最大吸收波长等性质,初步建立定性定量方法;发酵液组分复杂,建议先用TLC摸摸有多少组分,目标组分是几个,并且还能摸索下较好的展开剂系统,便于在此基础上摸索HPLC流动相系统;最后 ...

哦。非常感谢!!!我试着做一下...如果有问题还需要麻烦你...
人要靠自己
4楼2012-11-12 17:36:32
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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by reilon at 2012-11-11 14:44:16
高效。。。好像挺难的吧 用制备或者半制备液相呗

但是我老板要我做HPLC啊!要用制备型的先要用分析级的做,摸索一下条件...我以前没用过,所以问一下各位大侠。
人要靠自己
5楼2012-11-12 17:46:54
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小狼851226

木虫 (正式写手)

可以先看看紫外吸收情况。尝试摸索一下爬板条件。考察样品溶解性情况。选择简单的液质摸索,初步判断样品成份。选择一个比较合适的液相分离条件。验证,检测。---仅供参考。
6楼2012-11-13 10:37:38
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HSCCC-tauto

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

可以尝试一下高速逆流色谱(HSCCC) 一次有效分离多种物质
7楼2012-11-14 14:57:19
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reilon

金虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zfgtianya at 2012-11-12 17:46:54
但是我老板要我做HPLC啊!要用制备型的先要用分析级的做,摸索一下条件...我以前没用过,所以问一下各位大侠。...

你老板可以啊 怎么想用hplc 制备和分析的分离效果差别非常大 你就直接摸索制备就ok啦
8楼2012-11-14 20:57:51
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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by HSCCC-tauto at 2012-11-14 14:57:19
可以尝试一下高速逆流色谱(HSCCC) 一次有效分离多种物质

高速逆流色谱?直接没用过。仪器都没得哟
人要靠自己
9楼2012-11-16 15:58:17
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zfgtianya

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by reilon at 2012-11-14 20:57:51
你老板可以啊 怎么想用hplc 制备和分析的分离效果差别非常大 你就直接摸索制备就ok啦...

嗯,我现在也在试着摸索呢。。。
人要靠自己
10楼2012-11-16 15:58:49
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