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竹林里的小蛇银虫 (小有名气)
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[交流]
香蕉蛋白sds--page 蛋白只跑到了胶的一半 已有6人参与
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| 我提取的香蕉蛋白，跑了两次蛋白sds-page,两次都是溴酚蓝已经到了胶底的时候，取出凝胶染色，结果发现蛋白只跑到了凝胶的一半处，请问这个是什么问题啊。我用的电压是80v的。分离胶浓度12%,浓缩胶5%。 |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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SDS-PAGE啊 是聚丙烯酰胺的分子筛作用 溴酚蓝的分子量只有670，C19H10Br4O5S 670是什么概念呢？一个碳原子的直径是0.67nm，碳碳单键大概是0.7-1.5纳米左右。这么算，溴酚蓝即使是直链的状态也就大概30nm。 而SDS-PAGE据文献报道最好的交联尺寸（网状孔）为20nm 这么说，溴酚蓝在SDS-PAGE里面只受很小的阻力，所以跑的很快 当所跑的蛋白非常大或者非常小（比如小分子肽），这时候溴酚蓝的指示作用不明显，因为两者间所受的力相差太远了。 当SDS-PAGE浓度越高，溴酚蓝跟marker的相差越大，有时候不能很好的标定marker走到的地方了。 而且这时候的电压不能说明什么，应该看电流。电流的大小才是里面分子迁移的快慢吧。 个人见解，不知对否。还希望有高人证实或推翻我的猜想。 |
7楼2012-11-13 16:07:54
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
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2楼2012-11-11 02:14:09
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20