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竹林里的小蛇

银虫 (小有名气)

[交流] 香蕉蛋白sds--page 蛋白只跑到了胶的一半 已有6人参与

我提取的香蕉蛋白,跑了两次蛋白sds-page,两次都是溴酚蓝已经到了胶底的时候,取出凝胶染色,结果发现蛋白只跑到了凝胶的一半处,请问这个是什么问题啊。我用的电压是80v的。分离胶浓度12%,浓缩胶5%。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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检查配胶的缓冲液pH以及电泳缓冲液成分是否正确。
2楼2012-11-11 02:14:09
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)


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香蕉蛋白的分子量有多大呢,如果较大的话,跑在胶的中间很正常啊。提取的香蕉蛋白是纯化的蛋白还是全部蛋白呢?
3楼2012-11-12 09:44:33
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jl860822

金虫 (正式写手)



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多跑一段时间看看,要么可能就是缓冲液的pH有问题
4楼2012-11-12 20:27:30
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傻韩军

铜虫 (初入文坛)


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不是很懂  但是还是顶一下  希望有高人解答
思寻归属,力新力行
5楼2012-11-12 21:37:27
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)


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分子量就那么大把
6楼2012-11-12 21:39:10
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Phyrce

铜虫 (小有名气)


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SDS-PAGE啊
是聚丙烯酰胺的分子筛作用
溴酚蓝的分子量只有670,C19H10Br4O5S
670是什么概念呢?一个碳原子的直径是0.67nm,碳碳单键大概是0.7-1.5纳米左右。这么算,溴酚蓝即使是直链的状态也就大概30nm。
而SDS-PAGE据文献报道最好的交联尺寸(网状孔)为20nm
这么说,溴酚蓝在SDS-PAGE里面只受很小的阻力,所以跑的很快
当所跑的蛋白非常大或者非常小(比如小分子肽),这时候溴酚蓝的指示作用不明显,因为两者间所受的力相差太远了。
当SDS-PAGE浓度越高,溴酚蓝跟marker的相差越大,有时候不能很好的标定marker走到的地方了。
而且这时候的电压不能说明什么,应该看电流。电流的大小才是里面分子迁移的快慢吧。
个人见解,不知对否。还希望有高人证实或推翻我的猜想。
7楼2012-11-13 16:07:54
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