| 查看: 509 | 回复: 3 | |||
[求助]
关于雄性不育基因的克隆，目前卡在5’3‘端
|
|
我在克隆一个雄性不育相关基因，中间片段已经通过同源性设计的引物克隆得到，现在在用染色体步移的方法去克隆两端，用的是宝生物的genome walking的试剂盒，每次二三次pcr出来的丰度不是很大，但是可以切胶回收得到。然后送去测序，总是没有结果。 附测序公司的回信： 您的PCR样品5’(2)，3’(2)（使用相对应的引物）测序后发现有重叠现象,我们怀疑是由以下几个方面的原因造成的： 1.已纯化的PCR样品造成这种情况的原因是由于模板纯化有一定问题，模板中含有非特异性的条带； 2.如果是未纯化的PCR产物，那么有可能是您要求测序的片段周围含有大小相近的条带，我们通过琼脂糖凝胶回收，无法有效切除这种大小差别不是很明显的条带； 3.模板或是引物质量较差，测序反应结束之后没有产生足够的目的产物，导致测序信号较弱，杂背景较高，形成重叠现象。 这些原因都可能造成PCR样品测序之后出现重叠现象.建议您改进后重新进行测序。 附图是三次pcr 1%琼脂糖凝胶电泳全部点样后的图。  5\' 123 2012-9-11.jpg  3\' 123 2012-9-19.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
寻求一种能扛住强氧化性腐蚀性的容器密封件
已经有7人回复
-
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗
已经有8人回复
-
申请2026年博士
已经有6人回复
-
请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。
已经有5人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有5人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有7人回复
-
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗
已经有6人回复
-
Bioresource Technology期刊，第一次返修的时候被退回好几次了
已经有7人回复
-
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢
已经有5人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2012-11-09 16:42:58
3楼2012-11-09 16:43:25
4楼2012-11-30 11:01:04