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xiaoxia110

木虫 (正式写手)

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[求助] 关于Ni sepharose填料装柱子的相关问题

请问有谁自己用Ni sepharose填料装过柱子吗？该柱子用于AKTA上的，由于原来买的预装柱不能用了，老板又不买新柱子，故后来买了填料和空柱子，需要自己装。

1 请问直接将填料灌到柱子里就行了吗？
2 有没有什么技巧和注意事项？
3 怎样避免出错？
4 另外，有没有对预装柱进行重新再生的好方法？
柱子如下图所示：

U5IWA4]4UJS%IRH6W$R_4@J.jpg

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1楼 2012-11-09 16:05:19

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含具大长茎

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2楼2012-11-14 13:11:23

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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xiaoxia110: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-11-17 09:47:28

⑴ 让所有的材料和试剂达到室温。
⑵ 根据柱子大小取所需量的介质，清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液1（若是干粉直接用缓冲液1）配成匀浆，并作脱气处理。
⑶ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液1润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
⑷ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使介质在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑸ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1-3倍的流速流过，使柱床稳定。
4.平衡
用5-10倍柱体积的缓冲液1平衡柱子。
5.上样
将离心或过滤后的样品缓慢流过层析柱，用5-10倍柱体积缓冲液1洗去层析柱中未结合杂蛋白。
注：介质对样品的吸附程度取决于样品的性质和流动相的性质。
6.洗脱

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3楼2012-11-16 14:09:50

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4楼2012-11-16 16:05:51

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