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xiaoxia110木虫 (正式写手)
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[求助]
关于Ni sepharose填料装柱子的相关问题
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请问有谁自己用Ni sepharose填料装过柱子吗？该柱子用于AKTA上的，由于原来买的预装柱不能用了，老板又不买新柱子，故后来买了填料和空柱子，需要自己装。 1 请问直接将填料灌到柱子里就行了吗？ 2 有没有什么技巧和注意事项？ 3 怎样避免出错？ 4 另外，有没有对预装柱进行重新再生的好方法？ 柱子如下图所示：  U5IWA4]4UJS%IRH6W$R_4@J.jpg |
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2楼2012-11-14 13:11:23
yongbo_liang
新虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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xiaoxia110: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-11-17 09:47:28
xiaoxia110: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-11-17 09:47:28
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⑴ 让所有的材料和试剂达到室温。 ⑵ 根据柱子大小取所需量的介质，清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液1（若是干粉直接用缓冲液1）配成匀浆，并作脱气处理。 ⑶ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液1润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。 ⑷ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使介质在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。 ⑸ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1-3倍的流速流过，使柱床稳定。 4.平衡 用5-10倍柱体积的缓冲液1平衡柱子。 5.上样 将离心或过滤后的样品缓慢流过层析柱，用5-10倍柱体积缓冲液1洗去层析柱中未结合杂蛋白。 注：介质对样品的吸附程度取决于样品的性质和流动相的性质。 6.洗脱 |
3楼2012-11-16 14:09:50
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4楼2012-11-16 16:05:51