9楼: Originally posted by liamliu at 2012-11-09 11:39:02
如果你PCR得到的条带特异的话，可以不回收直接做连接，阳性克隆会更多一些，另外推荐使用全式金公司的平末端连接载体，连接得到的克隆数相比Takara要少些，但基本都是阳性克隆，Takara空质粒太多。

13楼: Originally posted by ym6104 at 2012-11-09 14:48:57
那请问楼主最后用的是什么感受态呢，，我现在也出现你这种问题，蓝白斑长满一板子，可是就是挑不出阳性克隆，用的是天根的DH5α。。。

14楼: Originally posted by jw1985629 at 2012-11-09 14:51:49
这样绝对不好，体系与体系间的酶都不一样，残留的酶跟离子都会影响下一部的体系，不做胶回收直接下一步怎么可以？...

12楼: Originally posted by tupac225 at 2012-11-09 13:44:10
一般都是感受态的问题，

11楼: Originally posted by hlv923 at 2012-11-09 13:23:06
引物二聚体吧！

6楼: Originally posted by charles08 at 2012-11-07 10:55:25
可能真有这方面原因，我上次得到的两个阳性都是连接过夜才出来的。
PCR产物浓度的话我那都是按回收试剂盒的做的。弄不清的是原来实验室做的话，很容易出来

现在换个地方，参数都一样，就是出不来，很奇怪

我 ...

19楼: Originally posted by rongduoyan at 2012-11-10 14:54:21
呵呵呵，同感，我也是换了一个实验室，条件比以前好，但是很多实验都做不出来了，狂晕啊...