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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教一下，这是否为假阳性克隆的问题，如果是，该如何提高阳性克隆效率？
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hlv923

铜虫 (小有名气)
引物二聚体吧！
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嘴角上扬，我也可以笑得很开心。
11楼2012-11-09 13:23:06
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般都是感受态的问题，
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coasttocoast。
12楼2012-11-09 13:44:10
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ym6104

金虫 (小有名气)
那请问楼主最后用的是什么感受态呢，，我现在也出现你这种问题，蓝白斑长满一板子，可是就是挑不出阳性克隆，用的是天根的DH5α。。。
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13楼2012-11-09 14:48:57
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jw1985629

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by liamliu at 2012-11-09 11:39:02
如果你PCR得到的条带特异的话，可以不回收直接做连接，阳性克隆会更多一些，另外推荐使用全式金公司的平末端连接载体，连接得到的克隆数相比Takara要少些，但基本都是阳性克隆，Takara空质粒太多。

这样绝对不好，体系与体系间的酶都不一样，残留的酶跟离子都会影响下一部的体系，不做胶回收直接下一步怎么可以？
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i still have so much to do
14楼2012-11-09 14:51:49
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by ym6104 at 2012-11-09 14:48:57
那请问楼主最后用的是什么感受态呢，，我现在也出现你这种问题，蓝白斑长满一板子，可是就是挑不出阳性克隆，用的是天根的DH5α。。。

问题解决了，12小时就得检验，否则会长满
另外保证效率就得连接过夜
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15楼2012-11-09 20:42:57
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by jw1985629 at 2012-11-09 14:51:49
这样绝对不好，体系与体系间的酶都不一样，残留的酶跟离子都会影响下一部的体系，不做胶回收直接下一步怎么可以？...

谢谢，问题已经解决。
卫星菌落干扰的问题
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16楼2012-11-09 20:45:10
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by tupac225 at 2012-11-09 13:44:10
一般都是感受态的问题，

问题解决了，
卫星菌落干扰的问题
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17楼2012-11-09 20:45:30
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by hlv923 at 2012-11-09 13:23:06
引物二聚体吧！

问题解决了，卫星菌落干扰的问题
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18楼2012-11-09 20:45:50
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rongduoyan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by charles08 at 2012-11-07 10:55:25
可能真有这方面原因，我上次得到的两个阳性都是连接过夜才出来的。
PCR产物浓度的话我那都是按回收试剂盒的做的。弄不清的是原来实验室做的话，很容易出来

现在换个地方，参数都一样，就是出不来，很奇怪

我 ...

呵呵呵，同感，我也是换了一个实验室，条件比以前好，但是很多实验都做不出来了，狂晕啊
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

charles08
19楼2012-11-10 14:54:21
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by rongduoyan at 2012-11-10 14:54:21
呵呵呵，同感，我也是换了一个实验室，条件比以前好，但是很多实验都做不出来了，狂晕啊...

所以有些经验还是得走了弯路才能收获的
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20楼2012-11-10 20:41:52
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