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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Xho1和EcoR1双酶切，切不开
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csdyg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你的样品是PCR产物，需要在引入酶切位点的两端添加保护碱基，或者先把PCR产物克隆至T载体，再进行酶切
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11楼2012-11-07 03:39:40
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huangguoqing

木虫 (正式写手)
个人建议，仅供参考！
适当减少酶的量，酶都是用50%或以上的甘油保存的，加入的酶量如果超过整体体系的1/10，会严重影响酶活，特别是对于一些带有星活性的酶，很可能出现错切，或者乱切。
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12楼2012-11-07 10:12:52
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星月0703

新虫 (小有名气)
建议用formentas的快酶 总体系用50ul
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13楼2012-11-07 12:21:27
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 牧歌ping at 2012-11-06 16:51:34
呵呵，懂了，刚一下没反应过来，25ul分为多管二次酶切是吧，谢谢了！...

是的，但是第二次酶切的时候由于浓度低可以每一个体系多加点
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
14楼2012-11-07 14:19:20
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Zedone

木虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-09 14:10:31
楼主，既然单酶切能切开，那么说明酶没有问题。我建议你这么做，首先，随便选两个酶其中的一个进行单酶切，然后再进行胶回收；接着用另外一个酶对回收后的产物进行单酶切。这样子的话，肯定能切开。但是首先一定要保证原先的PCR产物的浓度要高，否则两次胶回收后的东西浓度会不够。一般400bp的片段很容易连接上的。希望能帮到你。加油
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15楼2012-11-08 22:04:57
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