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csdyg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果你的样品是PCR产物,需要在引入酶切位点的两端添加保护碱基,或者先把PCR产物克隆至T载体,再进行酶切
11楼2012-11-07 03:39:40
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

个人建议,仅供参考!
适当减少酶的量,酶都是用50%或以上的甘油保存的,加入的酶量如果超过整体体系的1/10,会严重影响酶活,特别是对于一些带有星活性的酶,很可能出现错切,或者乱切。
12楼2012-11-07 10:12:52
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星月0703

新虫 (小有名气)

建议用formentas的快酶 总体系用50ul
13楼2012-11-07 12:21:27
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475502411

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 牧歌ping at 2012-11-06 16:51:34
呵呵,懂了,刚一下没反应过来,25ul分为多管二次酶切是吧,谢谢了!...

是的,但是第二次酶切的时候由于浓度低可以每一个体系多加点
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
14楼2012-11-07 14:19:20
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Zedone

木虫 (正式写手)

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-09 14:10:31
楼主,既然单酶切能切开,那么说明酶没有问题。我建议你这么做,首先,随便选两个酶其中的一个进行单酶切,然后再进行胶回收;接着用另外一个酶对回收后的产物进行单酶切。这样子的话,肯定能切开。但是首先一定要保证原先的PCR产物的浓度要高,否则两次胶回收后的东西浓度会不够。一般400bp的片段很容易连接上的。希望能帮到你。加油
15楼2012-11-08 22:04:57
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