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xulu2008金虫 (正式写手)
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[求助]
感受态细胞
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| 制作感受态细胞（用氯化钙法），有的资料是MgCl2-CaCl2溶液 ，有的是用只含CaCl2的溶液 ，到底哪个对呢？ |
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cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
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- 专业: 生物化学
2楼2012-11-06 11:00:37
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-11-06 17:22:51
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-11-06 17:22:51
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只要用氯化钙就行了，没那么严格的，给你的步骤就这样就行 1.从生长有大肠杆菌DH5α的平板上挑取一个单菌落，接种于2ml LB液体培养基中，37℃ 200r/min振荡培养过夜，作为一级种子。 2.将一级种子按1:50比例无菌转接到5ml LB液体培养基中，37℃ 200r/min振荡培养约2h-3h，至细菌的OD600达到0.5左右。 3.在无菌条件下将细菌转移到一个无菌的1.5ml Ep管中，冰浴30min。 4.4℃ 4000 r/min离心10min，弃上清。 5.加入1ml冰预冷的0.1mol/L CaCl2重悬沉淀，继续冰浴15min－30min。 6.4℃ 4000 r/min离心10min，弃上清。 7.沉淀中加入200μl用冰预冷的0.1mol/L CaCl2轻轻重悬。悬浮的感受态细胞可直接用于转化，若要保存，则需加入无菌甘油至终浓度为15%，分装100μl/管，-70℃保存备用。 |
3楼2012-11-06 11:42:20
