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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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海之精灵89

新虫 (小有名气)

[求助] 大片段连接

一个片段连接了三个月了,快崩溃了,开始连不上后来连上测序失败。
本人用鸭肝炎的全长分为两部分连接到PCDNA3.1Zeo(+)
连接的第一段3700,一次就连接上了而且测序目的片段和载体均正确;
连接第二段4000,开始连接不上,后来连接上,但测序无信号,再后来想办法设计引物测序,发现目的片段已经连接上且正确,但是载体不知为什么错了?



后来用改进的方法直接将鸭肝炎的ORF连接到改造的pCDNA上,用不同的引物进行PCR,全长都扩出来了,测序失败不知为什么?

请高人指点,或者有遇到类似情况的虫友帮忙?
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myfinalway

木虫 (正式写手)

鸭肝炎? 你不是南农的吧?
你可以找找 TAKARA公司的测序,比较贵 但是测序效果很好。
4楼2012-11-07 15:18:00
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
片段不长啊,在哪家公司测得?换一家试试
jiayoubashaonian
2楼2012-11-05 18:36:59
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海之精灵89

新虫 (小有名气)

在杰李和美吉都测过,都是无信号
3楼2012-11-07 08:09:07
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海之精灵89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by myfinalway at 2012-11-07 15:18:00
鸭肝炎? 你不是南农的吧?
你可以找找 TAKARA公司的测序,比较贵 但是测序效果很好。

Thanks 我用重新构建的载体
5楼2012-11-09 16:41:13
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