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大片段连接
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一个片段连接了三个月了，快崩溃了，开始连不上后来连上测序失败。 本人用鸭肝炎的全长分为两部分连接到PCDNA3.1Zeo(+) 连接的第一段3700，一次就连接上了而且测序目的片段和载体均正确； 连接第二段4000，开始连接不上，后来连接上，但测序无信号，再后来想办法设计引物测序，发现目的片段已经连接上且正确，但是载体不知为什么错了？ 后来用改进的方法直接将鸭肝炎的ORF连接到改造的pCDNA上，用不同的引物进行PCR，全长都扩出来了，测序失败不知为什么？ 请高人指点，或者有遇到类似情况的虫友帮忙？ |
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