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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
必须加氨苄,浓度也没问题,我们都是这么做的,建议看看你的质粒是不是在此菌是不是复制
11楼2012-11-06 14:28:09
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玉泉路园区

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chenxiang29: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-11-06 18:00:56
不加抗生素的话,没有筛选压力,质粒更加容易丢失啊。我们一般用amp80 ng/μL。 挑不到一个菌落14h没问题的。我经常这样。耐心等他涨起来就好了

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12楼2012-11-06 17:58:47
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by 玉泉路园区 at 2012-11-06 17:58:47
不加抗生素的话,没有筛选压力,质粒更加容易丢失啊。我们一般用amp80 ng/μL。 挑不到一个菌落14h没问题的。我经常这样。耐心等他涨起来就好了

谢谢啊,最近转化一直做不出来,摇菌后也提不出质粒啊
smile to the world
13楼2012-11-06 18:00:45
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by tangyuntao at 2012-11-06 11:26:16
加不到一个菌落是没有问题的,不过摇菌的时间要控制到指数期,貌似是12-16h,菌量是够的,氨苄的浓度100ug/ml,分子克隆讲的,加了是为了抑制其他杂菌生长吧,话说你的菌是有抗氨苄的基因吧。

有氨苄基因啊,那是不是要先摇一个小时等菌复苏产生抗氨苄物质,然后再加氨苄呢?
smile to the world
14楼2012-11-06 18:04:11
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星月0703

新虫 (小有名气)

氨苄的浓度50-100ug/ml都是可以的,我们实验室一般都是用50ug/ml
15楼2012-11-07 12:24:17
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