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丁香王子

铜虫 (初入文坛)


[交流] 菌落PCR与扩繁后提取质粒PCR

大家好,我连接后的克隆体经转化后菌落PCR检测有目的片段,扩繁提取质粒后却检测不出目的片段,请问是什么原因,谢谢!Sample Text
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(1)质粒当模板的时候,量要少,稀释几个梯度试试。
(2)直接做酶切鉴定就行了。
2楼2012-11-05 10:50:24
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阿留申

铜虫 (初入文坛)



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一般情况下菌液PCR出现假阳性的情况比较多。正常情况下,我们都是做菌液PCR(或者质粒做模版的PCR)+酶切鉴定,两个都是阳性的情况下基本上是没什么问题的。不知道对你有没有帮助!
3楼2012-11-05 11:17:54
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引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-11-05 10:50:24
(1)质粒当模板的时候,量要少,稀释几个梯度试试。
(2)直接做酶切鉴定就行了。

同意楼上,菌落PCR不是太靠谱,只能做参考,可以测序,PCR时,质粒浓度不能太大
4楼2012-11-05 11:19:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)



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菌落PCR可能有假阳性,最后还是提质粒做鉴定。用质粒为模板只需pg级,一般我都是用枪头沾一下混在PCR体系就可以了。不怕麻烦的话可以把质粒模板稀释1000倍。
5楼2012-11-05 14:03:47
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qhn0725

金虫 (小有名气)



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提取质粒后做个酶切验证或者用质粒做模板再做个PCR试一试?
6楼2012-11-15 20:24:09
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