应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR与扩繁后提取质粒PCR
61/1返回列表
查看: 2472  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

丁香王子

铜虫 (初入文坛)

[交流] 菌落PCR与扩繁后提取质粒PCR

大家好，我连接后的克隆体经转化后菌落PCR检测有目的片段，扩繁提取质粒后却检测不出目的片段，请问是什么原因，谢谢！Sample Text
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-11-05 09:22:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
（1）质粒当模板的时候，量要少，稀释几个梯度试试。
（2）直接做酶切鉴定就行了。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-05 10:50:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿留申

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般情况下菌液PCR出现假阳性的情况比较多。正常情况下，我们都是做菌液PCR(或者质粒做模版的PCR)+酶切鉴定，两个都是阳性的情况下基本上是没什么问题的。不知道对你有没有帮助！
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-11-05 11:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-11-05 10:50:24
（1）质粒当模板的时候，量要少，稀释几个梯度试试。
（2）直接做酶切鉴定就行了。

同意楼上，菌落PCR不是太靠谱，只能做参考，可以测序，PCR时，质粒浓度不能太大
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-05 11:19:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菌落PCR可能有假阳性，最后还是提质粒做鉴定。用质粒为模板只需pg级，一般我都是用枪头沾一下混在PCR体系就可以了。不怕麻烦的话可以把质粒模板稀释1000倍。
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-05 14:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qhn0725

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提取质粒后做个酶切验证或者用质粒做模板再做个PCR试一试？
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-15 20:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 丁香王子 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭