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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR与扩繁后提取质粒PCR
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丁香王子

铜虫 (初入文坛)

[交流] 菌落PCR与扩繁后提取质粒PCR

大家好，我连接后的克隆体经转化后菌落PCR检测有目的片段，扩繁提取质粒后却检测不出目的片段，请问是什么原因，谢谢！Sample Text
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1楼 2012-11-05 09:22:48
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
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（1）质粒当模板的时候，量要少，稀释几个梯度试试。
（2）直接做酶切鉴定就行了。
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2楼2012-11-05 10:50:24
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阿留申

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般情况下菌液PCR出现假阳性的情况比较多。正常情况下，我们都是做菌液PCR(或者质粒做模版的PCR)+酶切鉴定，两个都是阳性的情况下基本上是没什么问题的。不知道对你有没有帮助！
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3楼2012-11-05 11:17:54
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-11-05 10:50:24
（1）质粒当模板的时候，量要少，稀释几个梯度试试。
（2）直接做酶切鉴定就行了。

同意楼上，菌落PCR不是太靠谱，只能做参考，可以测序，PCR时，质粒浓度不能太大
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4楼2012-11-05 11:19:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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菌落PCR可能有假阳性，最后还是提质粒做鉴定。用质粒为模板只需pg级，一般我都是用枪头沾一下混在PCR体系就可以了。不怕麻烦的话可以把质粒模板稀释1000倍。
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5楼2012-11-05 14:03:47
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qhn0725

金虫 (小有名气)
★
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提取质粒后做个酶切验证或者用质粒做模板再做个PCR试一试？
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6楼2012-11-15 20:24:09
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