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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 怎么处理想要放在-80度冰箱里保存的菌种？
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霹雳娇娃

金虫 (小有名气)

[求助] 怎么处理想要放在-80度冰箱里保存的菌种？

买来的冻干菌，想活化使用，同时再保存一株到-80度冰箱备份。
请问，怎么处理想要放在-80度冰箱里的那株菌呢？用什么来保存？
我看资料中的甘油法都是在-20度保存。
之前实验室的师姐用脱脂牛奶处理后保存到-80度冰箱，但是具体方法不知道。
直接用液体培养基保存可以么？
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1楼 2012-11-01 18:41:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zqp9110

金虫 (正式写手)
比较方便的做法是把甘油用水配成50%的浓度，灭菌。保种的时候每管加300ul的50%甘油和700ul菌液，使甘油终浓度为15%，-80℃冻存。
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BEYOND
9楼2012-11-02 12:57:02
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小多余

铜虫 (小有名气)
你买回来的菌用什么保护剂呀？要选对保护剂，不然会死的很惨。另外你用什么保种？种子液还是斜面？举个例子：用斜面的话，配制体积比为30%的甘油水溶液，直接倒入多少ml(取决于你一个斜面保种多少只)洗下孢子液或者菌丝体，分装，最后就是30%保护剂。要是用种子液的话，要配成60%的甘油溶液，分装灭菌，一般是加入冻干管中，如果是不能灭菌的冻干管就成瓶灭菌再进无菌室分装，然后每个冻干管里加入与甘油溶液等体积的种子液，混匀即可。不过30%甘油用来保种的话，浓度太高了吧。。。。
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10楼2012-11-03 09:30:52
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木叶凌波

铜虫 (小有名气)
通常选用15-20%的甘油终溶度-80度保种，（有些菌保存一段时间就会死了，不同的菌不一样，-80度甘油冻存并不是对所有菌适用，所以珍贵的菌种，通常保种方式都会选择好几种一起做，甘油冻存，液氮保存，冻干保存等），再加海藻糖（5%）（很贵）等其他保护剂的话效果会更好。
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gotowardswhatyouareafraidof,tounderstandthatitcan'thurtyou
12楼2012-11-04 11:18:55
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普通回帖

jiangyinshen

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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霹雳娇娃: 金币+2 2012-11-01 18:55:04
霹雳娇娃: 金币+2 2012-11-02 11:18:18
加甘油再冻到-80
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不是風動，亦非幡動，仁者心動
2楼2012-11-01 18:49:20
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霹雳娇娃

金虫 (小有名气)
还有，30%甘油怎么配？把甘油溶于什么溶剂里啊。具体步骤？
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3楼2012-11-01 18:54:41
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

甘油用水稀释，这个问题这么简单，问问身边的同学就知道了
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不是風動，亦非幡動，仁者心動
4楼2012-11-01 19:02:04
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younx

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
霹雳娇娃: 金币+2 2012-11-02 11:18:02
scelab: 金币+3, 正解 2012-11-03 12:35:01
30%（ml/ml）甘油就是30ml的甘油加70ml的水里
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5楼2012-11-01 19:40:24
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
随便翻翻微生物书或者实验书上都有这些内容啊，怎么这么懒呢？
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6楼2012-11-02 09:14:03
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梅闲寒笑

金虫 (正式写手)
同意楼上所有的观点，，
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水墨丹青
7楼2012-11-02 09:27:27
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nauwg

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
霹雳娇娃: 金币+4 2012-11-02 11:17:28
用液体培养基肯定不行了,会形成尖锐晶体对菌种不好,甘油兑水用冻干机抽真空做冻干管保存.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2012-11-02 09:54:52
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