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霹雳娇娃

金虫 (小有名气)

[求助] 怎么处理想要放在-80度冰箱里保存的菌种?

买来的冻干菌,想活化使用,同时再保存一株到-80度冰箱备份。
请问,怎么处理想要放在-80度冰箱里的那株菌呢?用什么来保存?
我看资料中的甘油法都是在-20度保存。
之前实验室的师姐用脱脂牛奶处理后保存到-80度冰箱,但是具体方法不知道。
直接用液体培养基保存可以么?
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zqp9110

金虫 (正式写手)

比较方便的做法是把甘油用水配成50%的浓度,灭菌。保种的时候每管加300ul的50%甘油和700ul菌液,使甘油终浓度为15%,-80℃冻存。
BEYOND
9楼2012-11-02 12:57:02
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小多余

铜虫 (小有名气)

你买回来的菌用什么保护剂呀?要选对保护剂,不然会死的很惨。另外你用什么保种?种子液还是斜面?举个例子:用斜面的话,配制体积比为30%的甘油水溶液,直接倒入多少ml(取决于你一个斜面保种多少只)洗下孢子液或者菌丝体,分装,最后就是30%保护剂。要是用种子液的话,要配成60%的甘油溶液,分装灭菌,一般是加入冻干管中,如果是不能灭菌的冻干管就成瓶灭菌再进无菌室分装,然后每个冻干管里加入与甘油溶液等体积的种子液,混匀即可。不过30%甘油用来保种的话,浓度太高了吧。。。。
10楼2012-11-03 09:30:52
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木叶凌波

铜虫 (小有名气)

通常选用15-20%的甘油终溶度-80度保种,(有些菌保存一段时间就会死了,不同的菌不一样,-80度甘油冻存并不是对所有菌适用,所以珍贵的菌种,通常保种方式都会选择好几种一起做,甘油冻存,液氮保存,冻干保存等),再加海藻糖(5%)(很贵)等其他保护剂的话效果会更好。
gotowardswhatyouareafraidof,tounderstandthatitcan'thurtyou
12楼2012-11-04 11:18:55
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普通回帖

jiangyinshen

木虫 (著名写手)

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霹雳娇娃: 金币+2 2012-11-01 18:55:04
霹雳娇娃: 金币+2 2012-11-02 11:18:18
加甘油再冻到-80
不是風動,亦非幡動,仁者心動
2楼2012-11-01 18:49:20
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霹雳娇娃

金虫 (小有名气)

还有,30%甘油怎么配?把甘油溶于什么溶剂里啊。具体步骤?
3楼2012-11-01 18:54:41
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

甘油用水稀释,这个问题这么简单,问问身边的同学就知道了
不是風動,亦非幡動,仁者心動
4楼2012-11-01 19:02:04
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younx

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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霹雳娇娃: 金币+2 2012-11-02 11:18:02
scelab: 金币+3, 正解 2012-11-03 12:35:01
30%(ml/ml)甘油就是30ml的甘油加70ml的水里
5楼2012-11-01 19:40:24
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

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随便翻翻微生物书或者实验书上都有这些内容啊,怎么这么懒呢?
6楼2012-11-02 09:14:03
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梅闲寒笑

金虫 (正式写手)

同意楼上所有的观点,,
水墨丹青
7楼2012-11-02 09:27:27
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nauwg

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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霹雳娇娃: 金币+4 2012-11-02 11:17:28
用液体培养基肯定不行了,会形成尖锐晶体对菌种不好,甘油兑水用冻干机抽真空做冻干管保存.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2012-11-02 09:54:52
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