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xtmgah31银虫 (小有名气)
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[交流]
变性梯度凝胶电泳染色
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我在文献中看到：DGGE电泳结束后用50μg/m l 溴乙锭/1 ×TA E 染色10 分钟,再用1×TA E 缓冲液浸泡5 分钟退去部分杂色后, 使用GelDoc 1000 紫外检测系统观察电泳结果。 染色时1×TAE的作用是什么呢？它退色的原理又是什么呢？溴化乙锭的浓度对染色效果有很大的影响吗？please help me！ |
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johnsooh(金币+1):thanks
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DGGE最常用的几种染色方法是溴化乙啶（ethidium bromide, EB），SYBR Green I, SYBR Gold和银染法。EB 法染色的灵敏度最低。SYBR Green I 和 SYBR Gold 相比 EB，能更好地消除染色背景，因此它们的检测灵敏度比 EB 法高很多。EB 和 SYBR 染色时，双链 DNA 能很好地显色，单链 DNA 基本上不能显色。银染法的灵敏度最高，它不但能染双链 DNA，也能染单链 DNA，但它的缺点是不能用于随后的杂交分析。 聚丙烯酰胺凝胶背景会很容易加深，吸附较多的EB引起核酸荧光的悴灭，因此要用水或缓冲液来退去凝胶上多余的EB，利用1X的TAE为了维持一定的渗透压，使核酸带型更紧凑。其实水洗的更快，但影响美观的。 |
2楼2007-06-28 23:40:12