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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 难怪的问题
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小花木兰

银虫 (小有名气)

[求助] 难怪的问题

大肠杆菌发酵，为什么诱导后随时间变长，目标蛋白变少了，同时杂蛋白增加了，在凝胶上显示出来的。（诱导了25小时），菌体没有自溶，
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1楼 2012-10-30 20:26:25
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
时间太长了吧~25个小时了都~37度我一般诱导几个小时就差不多了，28度也只是过夜而已（16小时）
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2楼2012-10-30 22:19:26
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
诱导可以摸索一下时间温度和诱导剂用量，会有好结果的。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2012-10-31 18:52:27
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wwpjbnl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, 新虫加油 2012-11-07 13:40:26
大肠杆菌发酵，为什么诱导后随时间变长，目标蛋白变少了，同时杂蛋白增加了，在凝胶上显示出来的。（诱导了25小时），菌体没有自溶
  
呵呵，考虑一下诱导后随时间变长，是否已经超过了明白产物的合成时期。
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我没有停止前行的脚步，因为有梦。。。。
4楼2012-11-02 16:55:54
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wwpjbnl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

呵呵，考虑一下诱导后随时间变长，是否已经超过了目标产物蛋白的合成时期。
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我没有停止前行的脚步，因为有梦。。。。
5楼2012-11-02 16:56:49
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yanlinchun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是你构建的菌株本底就高？
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6楼2012-11-07 10:06:43
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小花木兰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yanlinchun at 2012-11-07 10:06:43
是不是你构建的菌株本底就高？

不是，菌株是老板回来的
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7楼2012-11-11 20:23:36
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d30314002

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-27 15:24:26
我先前做大肠杆菌高密度发酵时出现过这种情况，你用的什么抗生素，有可能是时间太长，抗生素失效，菌体质粒丢失。
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8楼2012-12-26 13:55:35
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小花木兰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by d30314002 at 2012-12-26 13:55:35
我先前做大肠杆菌高密度发酵时出现过这种情况，你用的什么抗生素，有可能是时间太长，抗生素失效，菌体质粒丢失。

卡那霉素
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9楼2012-12-26 20:40:42
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d30314002

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-27 15:24:19
我之前用的是氨苄，卡娜没用过，电泳目的条带变浅，杂蛋白变深，有很大可能是丢失质粒的菌在后期占了优势，因此时间越长，杂蛋白越多，目的蛋白越少。你可以考虑下这个方面
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10楼2012-12-26 23:15:56
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