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yaosl2011

银虫 (正式写手)

[求助] 花色苷抑制胰脂肪酶活性的测定方法

我正在做关于花色苷抑制胰脂肪酶活性的实验,用的方法为分光光度法,实验做了几次,但每次的实验结果都不一样,脂肪酶的抑制率和花色苷的浓度之间无任何关系,搞的我相当郁闷。现有几个问题想请大家解答:
1、能否用分光光度法测定花色苷对胰脂肪酶活性的影响?在该实验中,花色苷的浓度太大会不会不适应于该方法?花色苷浓度过大呈现深紫色,而产物为黄色,花色苷浓度过大会不会掩盖住产物,使该方法失效?已知反应条件为pH8.0,在pH8.0下,花色苷呈现紫色,反应底物为PNPP,产物为PNP,在405nm下测定吸光度来确定抑制率,但花色苷在405nm下也有吸收,花色苷会不会对吸光度产生影响?实验设计如图,请问该实验设计和抑制率计算公式可行否?
2、文献中有提及用分光光度法测定原花青素的报道,其浓度设定比较低,是不是花色苷的浓度对测定结果影响太大?如果调低浓度该方法能不能适用?最近做了几次实验都不顺利,还请大家一起解答,先行谢过了!!!

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koalarola

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

考虑一下是不是缓冲液体积的问题。你的量以微升计算,估计是用的是酶标仪测定,很多时候经典的3毫升反应体系是不能等比例缩小的,尝试一下根据你的参考文献和自己缩小的体积,对比测定,看看有没有不同。
2楼2012-11-25 12:43:37
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雨_轩

木虫 (正式写手)

你的底物是怎么溶解的?是不是已经全溶了?
3楼2015-03-20 18:04:36
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