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761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 层析技术

各位大侠们,我的木聚糖酶家族基因在毕赤酵母里面已经表达了,但是酶活和蛋白含量都比较低,我可以直接上离子柱和凝胶柱纯化 还是 说要对重组毕赤酵母的发酵条件进行优化呢?有知道的童鞋,指导我一下哈,十分感激呢
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每一个让你讨厌的现在,都有一个不努力的曾经。
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aloon111

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的目的是什么?如果是想得到更多的酶,可以先优化,优化后还是产量低,那你要考虑你的载体了。
汇天下之贤
2楼2012-10-27 10:25:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这要看你最终需要多少目的活性蛋白。计算一下目前的产量和活性是否可以满足需要。当然,做优化是很重要的,提高产率可以使后面的纯化工作更加轻松。
3楼2012-10-28 04:28:58
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Freya小何

金虫 (小有名气)

Daisy

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-28 19:23:11
发酵条件进行优化,还是很有必要的,从发酵时间、发酵温度、发酵底物等进行优化,然后设置一个正交实验提高产率,纯化的时候蛋白含量高一些,容易纯化。
每天都要进步一点点
4楼2012-10-28 09:21:13
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以挑取多一些单克隆进行表达测试,看能否挑到高表达的菌株,如果上罐的话,优化的周期会比较长。
我觉得可以先纯化一下,毕竟表达出来的浓度是比较低,一般能做个活性的定性分析就好了,只要确认了有活性,
经过纯化来浓缩,也是一个行之有效的方案。
小兵一个
5楼2012-10-31 09:04:49
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

一般纯化一边优化,但以纯化为主,因为如果不是追求产量,不是以生产为目的,那么酶学性质就肯定是比优化方法更重要。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2012-10-31 18:51:25
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