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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 有做过大鼠单向肠灌流试验的没~~重量法~~求交流~~~
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may可可

新虫 (小有名气)

[交流] 有做过大鼠单向肠灌流试验的没~~重量法~~求交流~~~

最近在做大鼠单向肠灌流试验，考察小肠各肠段对药物的吸收，采用重量法。每次灌药液的速度是0.2ml/min,每15Min收集一管流出液。大多数时候收集的流出液大于3ml，所以每次P值算出来都是负的。。。。不解。。。求大神分享一下经验
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1楼2012-10-23 21:07:25
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lzjxwc

银虫 (小有名气)
★
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理论上讲不可能进去的水比出来的水少，因为肠段吸收水，跟药物的，如果出来的水还多，那真要查查原因了，
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32楼2012-10-25 18:44:30
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天蓝灵

铜虫 (小有名气)
★ ★
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leecius: 金币+1, 谢谢，欢迎常来。 2012-10-24 09:04:42
要先用NaCl冲，再用空白灌流液平衡一段时间后才开始正式收集灌流液的，楼主之前有没有用空白的灌流液平衡30min左右啊？
另外想问下楼主，你是用什么型号的乙烯管插入大鼠肠道的呢？
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2楼2012-10-23 22:31:36
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may可可

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 天蓝灵 at 2012-10-23 22:31:36
要先用NaCl冲，再用空白灌流液平衡一段时间后才开始正式收集灌流液的，楼主之前有没有用空白的灌流液平衡30min左右啊？
另外想问下楼主，你是用什么型号的乙烯管插入大鼠肠道的呢？

在平衡之前用生理盐水冲了肠内容物，但平衡的时候用的不是空白灌流液，用的是含药的灌流液。会不会是这个出问题了？。管子的型号是3×5mm吧。。。
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3楼2012-10-23 22:43:10
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lzjxwc

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
个人意见了，你看下肠段有肿了没，你用含药的平衡的话，
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4楼2012-10-24 09:37:38
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may可可

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by lzjxwc at 2012-10-24 09:37:38
个人意见了，你看下肠段有肿了没，你用含药的平衡的话，

没有呀~
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5楼2012-10-24 09:41:52
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smallbird119

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为何不直接取血测血药浓度呢？
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6楼2012-10-24 10:08:27
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chendarao

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得其中有个关键地方就是灌流结束时候，是否要将肠道内的灌流液全部流完？文献上基本都没有介绍。我做的时候是没有流完的，但在做之前因为是用含药的灌流液平衡着的，所以个人认为不用全部流完。不知道你是怎么做的？这个跟体积有很大关系。
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7楼2012-10-24 10:45:45
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applemilk

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
要同时加一个对照，不进大鼠的，看一下是不是0.2ml/min,15min，仪器和计时会有误差的。你做几个肠段？
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8楼2012-10-24 11:01:15
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may可可

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by applemilk at 2012-10-24 11:01:15
要同时加一个对照，不进大鼠的，看一下是不是0.2ml/min,15min，仪器和计时会有误差的。你做几个肠段？

十二指肠  空肠 回肠 结肠   ~~~~我每次做出来的体积都会大于3.5ml，有的甚至4ml ....还有想请问一下 Papp（cm/s)的范围应该是多少属于高渗。。。看了好多，也没找到标准
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9楼2012-10-24 11:10:33
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may可可

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by smallbird119 at 2012-10-24 10:08:27
为何不直接取血测血药浓度呢？

测血药的话怎么从肠道给药，而且是不同的肠段都的考察
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10楼2012-10-24 11:15:27
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may可可

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by chendarao at 2012-10-24 10:45:45
我觉得其中有个关键地方就是灌流结束时候，是否要将肠道内的灌流液全部流完？文献上基本都没有介绍。我做的时候是没有流完的，但在做之前因为是用含药的灌流液平衡着的，所以个人认为不用全部流完。不知道你是怎么做 ...

我在计时收集流出液之前也是用含药的灌流液平衡的，每次仪器上显示3ml 就换另一管收集~~~我也觉得和体积有关系。。但是不知道为什么体积和预计的相差那么大。。。这个和流出液出口管放置的高度有关系么
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11楼2012-10-24 11:18:41
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天蓝灵

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我看过文献，直接用含药的灌流液平衡也有人这样做，应该问题不大。流出液的管得位置是有关的，进口管和出口管保持在同一高度避免重力作用灌流液往下溢流。
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12楼2012-10-24 12:53:12
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may可可

新虫 (小有名气)
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12楼: Originally posted by 天蓝灵 at 2012-10-24 12:53:12
我看过文献，直接用含药的灌流液平衡也有人这样做，应该问题不大。流出液的管得位置是有关的，进口管和出口管保持在同一高度避免重力作用灌流液往下溢流。

喔。。这个我倒是没怎么注意。。。下次做时尽量保持同一高度。。谢谢哈
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13楼2012-10-24 14:18:43
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applemilk

银虫 (小有名气)
★ ★
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may可可: 金币+1 2012-10-25 10:34:47
引用回帖:
9楼: Originally posted by may可可 at 2012-10-24 11:10:33
十二指肠  空肠 回肠 结肠   ~~~~我每次做出来的体积都会大于3.5ml，有的甚至4ml ....还有想请问一下 Papp（cm/s)的范围应该是多少属于高渗。。。看了好多，也没找到标准...

你有没有加体外空白对照呢，仪器和计时会有误差的呀，加一根管与在体的同时进行，做校正
还有你的肠段怎么放的？尽量保持原来的样子，不要牵拉
如果偶尔体积变大也是正常的，因为大鼠本身是活体的，它自身有生理活动，但不会每次都大
Papp范围我记得文献上有的，楼主还要在多看看文献
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14楼2012-10-24 14:29:08
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applemilk

银虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by may可可 at 2012-10-24 11:15:27
测血药的话怎么从肠道给药，而且是不同的肠段都的考察...

如果你真的要取血也是可以的，只不过操作比较麻烦
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15楼2012-10-24 14:30:36
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applemilk

银虫 (小有名气)
★
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11楼: Originally posted by may可可 at 2012-10-24 11:18:41
我在计时收集流出液之前也是用含药的灌流液平衡的，每次仪器上显示3ml 就换另一管收集~~~我也觉得和体积有关系。。但是不知道为什么体积和预计的相差那么大。。。这个和流出液出口管放置的高度有关系么...

这个当然有关系！而且大鼠的肠段你也要尽量还原本身的状态，减少牵拉，不要拉直、暴露在外
还有，lz怎么既然你是计时，为什么又是等显示3ml换管呢？
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16楼2012-10-24 14:33:36
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may可可

新虫 (小有名气)
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16楼: Originally posted by applemilk at 2012-10-24 14:33:36
这个当然有关系！而且大鼠的肠段你也要尽量还原本身的状态，减少牵拉，不要拉直、暴露在外
还有，lz怎么既然你是计时，为什么又是等显示3ml换管呢？...

恒流泵设置了流速   0.2Ml/min  15min 钟刚好就是3ml  所以，每次换管的时候就看恒流泵上的读数了
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17楼2012-10-24 14:45:08
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may可可

新虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by applemilk at 2012-10-24 14:29:08
你有没有加体外空白对照呢，仪器和计时会有误差的呀，加一根管与在体的同时进行，做校正
还有你的肠段怎么放的？尽量保持原来的样子，不要牵拉
如果偶尔体积变大也是正常的，因为大鼠本身是活体的，它自身有生理 ...

一般先把肠段取出来插管 冲洗内容物  结扎 放回肠腔    我做的每管流出液体积都超过了3.5ml ....
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18楼2012-10-24 14:47:14
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applemilk

银虫 (小有名气)
★
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17楼: Originally posted by may可可 at 2012-10-24 14:45:08
恒流泵设置了流速   0.2Ml/min  15min 钟刚好就是3ml  所以，每次换管的时候就看恒流泵上的读数了...

我的建议：不要迷信仪器，理论上是3ml，还是要测一下的
还有你换管要控制时间、注意节奏，你看一下4段管子换一下是不是也要时间也占体积的吧
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19楼2012-10-24 15:25:11
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may可可

新虫 (小有名气)
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19楼: Originally posted by applemilk at 2012-10-24 15:25:11
我的建议：不要迷信仪器，理论上是3ml，还是要测一下的
还有你换管要控制时间、注意节奏，你看一下4段管子换一下是不是也要时间也占体积的吧...

换管子的时候我将泵停止了。。
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20楼2012-10-24 16:06:10
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lzjxwc

银虫 (小有名气)
★ ★
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may可可: 金币+1 2012-10-25 10:36:03
其实我觉得你应该把实验在描述下子，流入跟流出都是有差别的，你根据先根据计算公式算下在说了，还有Peff有很多文献上有说明的，一般公式怎么换算的你自己查下，先有个概念，看你的脂水分配系数，基本判断下你实验有没有问题。
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21楼2012-10-24 16:15:38
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may可可

新虫 (小有名气)
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21楼: Originally posted by lzjxwc at 2012-10-24 16:15:38
其实我觉得你应该把实验在描述下子，流入跟流出都是有差别的，你根据先根据计算公式算下在说了，还有Peff有很多文献上有说明的，一般公式怎么换算的你自己查下，先有个概念，看你的脂水分配系数，基本判断下你实验有 ...

流入和流出有轻微的差别可以接受  我测出来的流出液校正浓度都相对于灌进去的小  比如说灌进去的40ug/ml  测出来流出液是39.5ug/ml   。。。但是灌进去的体积是3ml,流出液体积3.8ml......这样一来 算出来吸收百分数P为负  Papp也跟着负了。。。。。谢谢你啊
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22楼2012-10-24 16:25:15
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lzjxwc

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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22楼: Originally posted by may可可 at 2012-10-24 16:25:15
流入和流出有轻微的差别可以接受  我测出来的流出液校正浓度都相对于灌进去的小  比如说灌进去的40ug/ml  测出来流出液是39.5ug/ml   。。。但是灌进去的体积是3ml,流出液体积3.8ml......这样一来 算出来吸收百分数 ...

重量法用的是重量差吧，体积的话根据密度调整的吧，我觉得你应该去测下灌进去的的质量，还有流出液的质量。这样靠谱点，而且流出液的浓度差别不大，反正不太好说了。
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23楼2012-10-24 16:39:23
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may可可

新虫 (小有名气)
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23楼: Originally posted by lzjxwc at 2012-10-24 16:39:23
重量法用的是重量差吧，体积的话根据密度调整的吧，我觉得你应该去测下灌进去的的质量，还有流出液的质量。这样靠谱点，而且流出液的浓度差别不大，反正不太好说了。...

其实我说的体积 就是质量 我们默认流出液密度是1 g/ml 灌进去的质量就是 15min  0.2ml/min  流出液的质量称重得到
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24楼2012-10-24 16:48:17
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lzjxwc

银虫 (小有名气)
★
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http://scholar.google.com.hk/sch ... s&btnG=&lr=
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25楼2012-10-24 16:48:35
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applemilk

银虫 (小有名气)
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20楼: Originally posted by may可可 at 2012-10-24 16:06:10
换管子的时候我将泵停止了。。...

泵不要停
顺便问下你用的是什么样子的泵
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26楼2012-10-24 19:21:08
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天之羽翼

银虫 (小有名气)
加体外空白对照。
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27楼2012-10-24 20:58:08
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may可可

新虫 (小有名气)
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26楼: Originally posted by applemilk at 2012-10-24 19:21:08
泵不要停
顺便问下你用的是什么样子的泵...

PHD2000  不停泵？？
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28楼2012-10-24 21:19:15
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applemilk

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28楼: Originally posted by may可可 at 2012-10-24 21:19:15
PHD2000  不停泵？？...

啊，这泵你们实验室用了多久了？一定要加体外空白对照！！
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29楼2012-10-24 23:24:54
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may可可

新虫 (小有名气)
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29楼: Originally posted by applemilk at 2012-10-24 23:24:54
啊，这泵你们实验室用了多久了？一定要加体外空白对照！！...

新买的~~~
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30楼2012-10-25 08:33:05
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smallbird119

木虫 (正式写手)
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采用肠段结扎法 然后不同肠段分别给药 取血测血药浓度
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31楼2012-10-25 09:55:30
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872726898

新虫 (初入文坛)
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想请教一下，实验过程中要8次取样，每隔15分钟，这样做的目的是不是要分别计算出这8次的吸收系数，然后取其平均值作为该肠段的吸收系数啊？
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33楼2013-05-03 21:49:25
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872726898

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
23楼: Originally posted by lzjxwc at 2012-10-24 16:39:23
重量法用的是重量差吧，体积的话根据密度调整的吧，我觉得你应该去测下灌进去的的质量，还有流出液的质量。这样靠谱点，而且流出液的浓度差别不大，反正不太好说了。...

想请问一下，实验结束后剪下肠段测定其半径和长度吗？但是实验时肠段是扩张很大的，半径应该是比实验结束后的大多了，想请教一下大家都是怎么测的？
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34楼2013-05-20 09:57:43
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豹子叔叔

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33楼: Originally posted by 872726898 at 2013-05-03 21:49:25
想请教一下，实验过程中要8次取样，每隔15分钟，这样做的目的是不是要分别计算出这8次的吸收系数，然后取其平均值作为该肠段的吸收系数啊？

多测几次的目的当然是取平均值来用了。但不必要八次，取其中的六次拿来计算平均值就可以了。八次的目的是以防实验过程出现不测以致某几次的不能用。注意实验之前要用含药试液平衡30 min。用含药试液平衡之前要用缓冲液冲洗相当长一段时间，也可以是30 min，但关键是你得把粪便都冲洗干净，这是缓冲液冲洗的主要目的之一。
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35楼2018-05-03 15:53:47
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豹子叔叔

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33楼: Originally posted by 872726898 at 2013-05-03 21:49:25
想请教一下，实验过程中要8次取样，每隔15分钟，这样做的目的是不是要分别计算出这8次的吸收系数，然后取其平均值作为该肠段的吸收系数啊？

是的，多次测量的目的都是为了要平均值。但没必要8次，多测几次的目的是以防实验过程出错，这样你可以从8次里面拿够你要的次数，一般是6次。注意实验之前要用含药试液平衡30 min，而用含药试液平衡之前要用K-R缓冲液冲洗相当一段时间，也可以是30 min，其主要目的之一是冲干净肠道残留物。
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36楼2018-05-03 15:59:00
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